hmgb1在脓毒症小鼠心肌成纤维细胞的表达水平及其对心肌纤维化中的作用研究

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1、分类号B兰窆2：!!UDC612密级公珏编号!Q2窆窆S!Q!垒Q2l@江荨大擎硕士学位论文M俊STER'SDISSERTATIoN论文题目趔Q旦!在肱壹症4∑鼠!坠皿盛红维细胞的麦达丞壬厘墓盟!坠血红维化的佳且班究专业名称!临废检验诊断堂作者姓名芝晶垩指导教师迕化淫教援论文答辩日期2Q13生鱼目昼目2013年6月分类号3窆2：!!UDC612硕士学位论文密级公珏编号!Q2窆窆S!Q!垒Q21HMGBl在脓毒症小鼠心肌成纤维细胞的表达水平及其对心肌纤维化中的作用研究THESTUDYoFHMGBlEXPRESSIoNINC

2、ARDIACFⅡlRoBALSTSCONTRIBUTEDTOCARD队CFmROSISINSEPSISMICE作者姓名：尹晶平指导教师：许化溪教授小组成员：王胜军教授苏兆亮讲师申请学位：硕士学科专业：临床检验诊断学论文答辩日期：2012年6月8日学位授予单位：江苏大学学位授予日期：伊弓款扫刍门茸答辩委员会主席：张晓膺教授评阅人：独创性声明JIIIllrlIllIrlrlflIIrFIffY2294317本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不

3、包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位做作者躲弘争签字日期：如；年；月，善日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国

4、科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期干U(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密函，保密口，在一年后解密适用本授权书。导师签名签字日期：矽；．o··．7趴可V钔矛-名J签屿者伊作y文期论日位字学签江苏大学硕士学位论文摘要目的：高迁移率族蛋白Bl(highmobilitygroupproteinBl，HMGBl)参与脓毒症和心血管疾病发生发展，但在脓毒症状态下

5、其对心肌成纤维细胞(cardiacfibroblasts，CFs)的作用尚未见报道。鉴于心肌纤维化是心功能衰竭的重要病理特征，本研究探讨了小鼠CFs细胞在LPS刺激下分泌HMGBl的能力及其可能的分子机制；分析了CFs细胞分泌的HMGBl在I、III型胶原和骨桥蛋白表达中的作用；并以脓毒症小鼠模型为研究对象，整体观察了HMGBI对心肌纤维化及心功能的影响。方法：(1)HMGBl及其相关受体的检测：体外分离和培养小鼠CFs细胞，PCR检测HMGBl相关受体TLR2／4／9和RAGE等的表达。用LPS(500ng／mi)束J

6、J激CFs细胞后，台盼蓝染色检测细胞的活性；利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Westernblot及免疫荧光染色检测HMGBl的表达及其在细胞内定位情况；同时利用qRT-PCR和Westernblot检测I、III型胶原和骨桥蛋白mRNA、蛋白的表达水平。(2)HMGBI表达与PKCl3．Erkl／2信号通路关系的分析：体外采用LPS刺激细胞后，通过Westernblot方法检测PKC[j·Erkl／2信号分子的活化情况；PKC[1抑制剂阻断后Westernblot检测HMGBl的表达情况。(3)HMGBl对C

7、Fs细胞的刺激作用：体外应用rHMGBl刺激CFs细胞，Westernblot法检测I、III型胶原蛋白和骨桥蛋白，同时用PKCIB抑制剂或EP进行HMGBl的阻断试验。(4)小鼠脓毒症模型的诱导及HMGBl与心肌纤维化关系的体内研究：腹腔注射LPS(10mg／kg)诱导小鼠脓毒症模型，B超检测LPS注射24小时后小鼠心脏收缩功能的变化。免疫荧光法检测脓毒症小鼠心肌组织HMGBl的水平，并用天狼星红染色评估其胶原沉积情况。结果：(1)成功分离小鼠CFs细胞，其表面表达TLR2及TLR4，未检测到TLR9和RAGE的明显表

8、达。LPS(500ng／m1)刺激CFs细胞48h后细胞活性无明显变HMGBi在脓毒症小鼠心肌成纤维细胞的表达水平及其对心肌纤维化的作用研究化，qRT-PCR及Westernblot显示HMGBl的表达明显增高，与未处理组相比有统计学差异(P<0．05)。免疫荧光染色观察到HMGBl由细胞核向细胞浆的易位．并在细胞上