黑果枸杞内生真菌rer4次生代谢产物的研究

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1、瞎压斜技大学论文题目：黑果枸杞内生真菌RER4次生代谢产物的研究学科门类：工学一级学科：化学工程与技术培养单位：化学与化工学院硕士生：王鹏飞导师：马养民教授2014年5月TITLETHESECoNDARYMETABoLITESoFENDOPHYTICFUNGIRER4FRoM三鞠CZ砌fRU刀圃曰吼‘跏歹AThesisSubmittedtoShaanxiUniversityofScienceandTechnologyinPartialFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofEngineering

2、ScienceBySupervisor：Prof．．Y．．．a．．．n．．．g．．．m．．．．．i．．n．．．．M．．．．．．a．May2014黑果枸杞内生真菌RER4次生代谢产物的研究摘要为了对黑果枸杞内生真菌进行深入研究，本课题以20株耐盐碱黑果枸杞内生真菌中的一株抗菌活性较强的曲霉属真菌RER4为研究对象，采用形态学鉴定方法结合分子生物学鉴定方法，鉴定出该真菌为米曲霉(Aspergillusoryzae)。以大米为培养基，对黑果枸杞内生真菌RER4进行固态发酵，发酵物阴干后用石油醚、乙酸乙酯、甲醇依次进行提取，浓缩后得到粗品浸膏2059。化学成分

3、预分析结果表明，黑果枸杞内生真菌RER4次生代谢产物中含有甾体，有机酸，生物碱，内酯类等化合物。采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱及重结晶等手段进行分离纯化，最终得到16个化合物。对16个化合物进行理化性质结合核磁共振、高分辨质谱等分析，确定16个化合物分别为：麦角甾醇、尿黑酸内酯、6．柠檬酸甲酯、琥珀酸、1，5．柠檬酸二甲酯、5-hydroxymethylfuran．3．carboxylicacid、2,5．二羟基苯乙酸甲酯、柠檬酸、pyranonigrinsA、campyronesA、4．乙酰氨基丁酸、rubrofusarinB、asperpyronesA

4、、赤薛醇、甘露醇、阿拉伯糖醇。目前关于米曲霉化学成分的研究报道较少，尿黑酸内酯、5-hydroxymethylfuran．3．carboxylicacid、2，5．二羟基苯乙酸甲酯、pyranonigrinsA、campyronesA、4．乙酰氨基丁酸、rubrofusatinB、asperpyronesA均为首次从米曲霉发酵物中分离得到。黑果枸杞内生真菌RER4次生代谢产物中含有多种吡喃酮衍生物，这使得RER4有望成为一株新的“工程菌”。对化合物尿黑酸内酯、2，5．二羟基苯乙酸甲酯、pyranonigrinsA、rubrofusarinB、asper

5、pyronesA做抗氧化实验，实验结果表明尿黑酸内酯和2，5．二羟基苯乙酸甲酯对DPPH的自由基清除率的IC50值与维生素C(IC。。=6．93lxg／mg)相当。分析5个化合物及Vc的构效关系可得知：化合物抗氧化活性和其结构上易被氧化的基团，及其所处的化学环境有关。以4株细菌(大肠杆菌，绿脓杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌)和4株植物病原真菌(尖孢镰孢菌，小麦赤霉病菌，苹果树腐烂病菌，番茄灰霉病菌)对16个化合物进行抑菌活性测试，测试结果表明：9个化合物对细菌和真菌生长表现出不同的抑制作用，尿黑酸内酯和2，5．二羟基苯乙酸甲酯对细菌和真菌均表现出较

6、好的抑制作用，pyranonigrinsA和asperpyronesA对细菌生长有较好的抑制作用，5-hydroxymethylfuran．3．carboxylicacid对革兰氏阴性菌生长有较好的抑制作用。总之，本课题对黑果枸杞内生真菌RER4次生代谢产物研究，分离到16个单体化合物，通过对这些化合物抗氧化活性和抑菌活性的评价，发现了两个具有较强抗氧化活性的化合物，同时这两个化合物对细菌和真菌生长均有较好的抑制作用。上述研究表明植物内生真菌具有丰富多样的次生代谢产物，是开发新型药物的重要来源。关键词：内生真菌，黑果枸杞，代谢产物，抗氧化活性，抑菌活性

7、ⅡTHESECoNDARYMETABoLITESOFENDoPHYTICFUNGIR皿R4FRoM三I厂CZZ刀l夕RUTHENICUMABSTRACTInordertomadeafurtherstudyofendophyteinLyciumruthenicum，astrongantibacterialactivityAspergillusfungusRER4from20salinityfungiofLyciumruthenicumwasstudiedinthisthesis．Usingmorphologicalidentificationmethod

8、scombinedwithmolecularbiology,weidentifiedthisf