怀菊花脱毒快繁技术及脱毒苗大田适应性研究

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1、STUDY0NTECHNOLOGYOFVIRUS-FREE，RAPIDPROPAGATIONANDⅥRUS．FREEPLANTLET’SFIELDADAPTATIONOFHUAIQINGCHRYSANTHEMUMADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceBySupervisor：AssociateProfessorZhaoXitingPro

2、fessorLiMingjunMay2014摘要本研究以怀菊花优良品种小黄菊[Htmiqingchrysanthemum(Chrysanthemummorifolium)CV．Xiaohuangju]为试材，首次建立了怀菊花的脱毒快繁技术体系，并且对获得的脱毒试管苗的生理生化特性、遗传稳定性和大田适应性进行了系统研究。取得了如下研究结果：1．建立了怀菊花的脱毒快繁技术体系(1)适宜的脱毒培养方式是先热处理(白天38℃，12h；夜晚30℃，12h)6周，再切取带有一个叶原基的茎尖(0．3"--0．5nun)，置于MS+KT0．03mg／L培养基上培养，待长

3、成苗后再切离茎尖，培养成苗。成苗率达54％，脱毒率达80％。(2)脱毒苗快速繁殖适宜的培养基是MS+NAA0．05mg／L+6-BAO．01mg／L，壮苗生根的培养基是1／2MS+PP3330．2mg／L，其壮苗生根效果最好，移栽时苗根系发达，叶色浓绿，茎杆粗壮，移栽成活率达95％。2．探明了脱毒对怀菊花试管苗生理生化和遗传稳定性的影响(1)脱毒提高了怀菊花的光合能力以及N代谢水平。与对照苗相比，在生长发育过程中，脱毒试管苗叶片中叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量显著增加，NR活力、Pro含量和可溶性蛋白含量均显著提高。(2)脱毒降低了怀菊花的膜脂过氧化程

4、度，提高了抗膜脂过氧化能力。与对照苗相比，培养期间，脱毒试管苗叶片中MDA含量、2"-生成速率和H202含量均低于对照苗，酶促清除系统的5中保护酶(SOD、POD、CAT、APX、GR)活力增加，非酶促的2种保护物质(ASA、GSH)含量增加，均达到显著性差异(P=O．05)。(3)同工酶水平和分子水平的证据显示脱毒处理没有改变怀菊花的遗传稳定性。经POD、SOD同工酶比较，脱毒苗与对照苗的条带数并没有发生变化，而亮度高于对照苗，说明脱毒后POD、SOD的稳定性没有改变，活性却增加了；在DNA水平上，用筛选出的引物ISSR05对脱毒苗和对照苗进行ISSR

5、检测，二者扩增出的9条条带均没有差异。3．脱毒增强了怀菊花的大田适应性，提高了产量、改善了品质，筛选出了脱毒优T良株系。(1)脱毒增强了怀菊花的大田长势。不同脱毒株系的株高、冠幅均高于对照，以脱毒株系YD5J6最为突出，与其对照株系YD5相比，在P=O．05水平上，株高在8、9、10月达显著性差异，冠幅在每个月都有显著性差异。(2)脱毒没有改变怀菊花的花期，但提高了其产量。与对照株系相比，脱毒株系单株鲜重、单株干重、单株花头数、单株分蘖数、舌状花花瓣的长度和宽度均有所增加，其中脱毒株系YD5J6的单株花头数、单株干重、单株鲜重、亩产与其对照株系YD5相比

6、均达到显著性差异(P=O．05)，亩产(鲜重)可达1170．12kg，增幅为16．4％。(3)脱毒提高了与绿原酸和木樨草苷合成相关的关键酶的活力，改善了品质。各脱毒株系花瓣的PAL、C4H、4CL活力在四个花期(现蕾期、透色期、初花期、盛花期)均高于对照株系，透色期达到最高，其中脱毒株系YD5J6与其对照株系YD5在各个花期均达显著性差异(P=0．05)；各脱毒株系花瓣中绿原酸、木犀草苷含量均高于对照，且脱毒株系YD5J6与其对照株系YD5有显著性差异(P=0．05)，绿原酸含量高达0．790,4，木犀草苷含量高达0．22％，增幅分别为39．7％，62．

7、6％。综合以上，本研究不仅建立了有效的怀菊花脱毒快繁技术体系，而且筛选出了表现优良的脱毒株系，为怀菊花脱毒苗的推广与应用提供了理论依据。关键词：怀菊花，脱毒，快繁，脱毒苗，大田适应性HABSTRACTXiaohuang；ju,whichisaexcellentvarietyofHuaichrysanthemum，Waqused够experimentalmaterialsinthisstudy．Thetechnologysystemofvirus—freeanditsrapidpropagationofHuaichrysanthemumwasestabli

8、shed，andithadbeensystematicallystudiedth