电感耦合等离子体质谱联用技术定量分析人血清蛋白质的方法研究

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1、北京化工大学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：日期：丝!生垒鱼目兰宴关于论文使用授权的说明学位论文作者完全了解北京化工大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期问论文工作的知识产权单位属北京化工大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许学位论文被查阅和

2、借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。口论文暂不公开(或保密)注释：本学位论文属于暂不公开(或保密)范围，在一年解密后适用本授权书。，明E暂不公开(或保密)论文注释：本学位论文不属于暂不公开(或保密)范围，适用本授权书。作者签名：导师签名：锨磁／己)∥、日期：型鱼生笪鱼主垦日期：渔f坠垒‘虽主垦学位论文数据集中图分类号0657．63学科分类号43025论文编号i00i020140537密级公开学位授予单位代码10010学位授予单位名称北京化工大学作者姓名张丹学号20l1200537获学位专业名

3、称材料科学与工程获学位专业代码0805国家质检总局公益性基于ICP-MS联用技术课题来源行业科研专项(批准研究方向的蛋白质定量技术研究号：201110008)论文题目电感耦合等离子体质谱联用技术定量分析人血清蛋白质的方法研究电感耦合等离子体质谱，高效液相色谱，聚丙烯酰胺凝胶电泳，同位关键词素稀释法，人血清论文答辩日期2014年5月25日论文类型开发研究学位论文评阅及答辩委员会情况姓名职称工作单位学科专长指导教师熊金平副教授北京化工大学腐蚀与防护评阅人l王海侨教授北京化工大学拣糙津评阅人2赵旭辉副教授北京化工大学腐蚀与防护评阅人3评阅人4评阅人5答辩委员会

4、主席刘建华教授北京航空航天大学腐蚀与防护答辩委员1左禹教授北京化工大学腐蚀与防护答辩委员2贾梦秋教授北京化工大学腐蚀与防护答辩委员3唐聿明副教授北京化工大学腐蚀与防护答辩委员4赵旭辉副教授北京化工大学腐蚀与防护答辩委员5注：一．论文类型：1．基础研究2．应用研究3．开发研究4．其它二．中图分类号在《中国图书资料分类法》查询。三．学科分类号在中华人民共和国国家标准(GB／T13745—9)《学科分类与代码》中查询。四．论文编号由单位代码和年份及学号的后四位组成。摘要电感耦合等离子体质谱联用技术定量分析人血清蛋白质的方法研究作为人血清蛋白质中两种非常重要的蛋

5、白质：转铁蛋白和白蛋白，其含量水平对于炎症、冠心病、贫血等疾病的诊断，疾病标志物的发现，人在病理条件下的机理研究等方面意义重大。为准确定量分析人血清转铁蛋白、白蛋白，开发基于电感耦合等离子体质谱ICP．MS联用技术的定量方法很有必要，能进一步提高我国生命科学的测量水平，深入开展测量溯源性研究。本工作的主要内容包括：(1)HPLC。ID．ICP—MS定量方法的建立：以四种混合标准蛋白作为样品，建立了柱后同位素稀释法与高效液相色谱．电感耦合等离子体质谱联用的定量方法。(2)人血清液相分离条件的确定：从色谱柱的选择、时间程序、流动相组成等方面进行实验优化，确定

6、了人血清成功分离转铁蛋白Tf、白蛋白Alb的液相分离条件。(3)人血清中Tf,Alb的定量分析：将建立的HPLC．ID—ICP—MS定量方法应用到人血清中Tf,Alb的同时定量分析，柱后同位素稀释法时，采用富集同位素34S、54Fe的混合溶液作为稀释剂，通过硫、铁元素的同时检测，对血清中Tf进行了硫、铁共同定量；采用改变34S稀释剂流速的方法，对血清中Tf、Alb进行同时定量分析；以人血清蛋白标准物质(ERM。DA470／IFCC)为样品，对建立方法定量的准确性、可靠性进行验证。(4)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离人血清条件的确定。(5)电泳后同位素

7、稀释条件的确定：通过激光烧蚀进样电感耦合等离子体质谱(LA．ICP—MS)评价三种不同的34S稀释剂添加方式后发现，将电泳后的凝胶条带浸泡在34S稀释剂中可成功在凝胶上引入34S稀释剂信号，对不同34S稀释剂浓度及浸泡时间进行实验优化。(6)将建立的电泳后同位素稀释法与PAGE—LA．ICP—MS北京化工大学硕士学位论文方法结合，对人血清中Tf、Alb进行定量分析，采用人血清蛋白标准物质进行方法验证。本工作通过大量的实验研究，分别建立了基于ICP．MS联用技术的HPLC．ID．ICP．MS、PAGE．LA．ID．ICP．MS定量方法，并确定了人血清中转铁

8、蛋白Tf、白蛋白Alb的液相色谱分离、凝胶电泳分离条件，最终将定量方法应用到这两