cd、pb、hg暴毒下泥蚶的分子生态毒理学研究

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1、学校代码:10264研究生学号:M100101066上海海洋大学硕士学位论文Cd、Pb、Hg暴毒下泥蚶的分子生态毒题目:理学研究Molecularecotoxicologicalstudiesof英文题目:bloodclam,TegillarcagranosaexposedtoCd,Pb,Hg专业:水产养殖研究方向:海洋贝类养殖生物学姓名:顾海龙指导教师:林志华研究员二0一三年五月三十日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明:我恪守学术道德,崇尚严谨学风。所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外,本论文不包

2、含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写,我对所写的内容负责,并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日期:年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□,在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日

3、上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注宁波市海洋与渔业尤仲杰研究员主席研究院王国良宁波大学教授委员包永波浙江万里学院副研究员委员毛芝娟浙江万里学院副教授委员委员委员委员胡松浙江万里学院助理研究员秘书答辩地点浙江万里学院答辩日期2013.5上海海洋大学硕士学位论文Cd、Pb、Hg暴毒下泥蚶的分子生态毒理学研究摘要近几十年来,随着越来越多的技术手段应用,水体环境污染研究已取得了飞速的发展。其中,以生物标志物监测水环境重金属污染以其价廉、广谱性、灵敏度高等特点成为目前环境科学界的研究热点。水体重金属污染以其分布范围广、持续时间长、不易分解、易被生物体富集

4、等特点已经成为全球性的环境问题,受到了世界范围内的广泛关注。双壳贝类一般移动性很差,活动范围小,并且分布广泛,种类、数量繁多,容易暴露于各种水体重金属污染物中并对其进行富集,是一种非常理想的水体重金属污染指示生物。本文以东南沿海一带典型的经济物种,埋栖型滩涂养殖贝类——泥蚶为研究对象,选择Cd、Pb、Hg三种最常见重金属污染物,在总结前人的研究成果基础上,开展了泥蚶卵黄蛋白原2+2+2+(vitellogenin,Vg)基因克隆及其合成方式研究;在Cd、Pb、Hg暴毒下,泥蚶体内抗氧化酶活性、脂质过氧化物及VgmRNA表达水平变化等研究,初步探讨Cd、Pb、Hg对泥蚶的毒

5、性机制。主要研究结果如下:1Cd、Pb、Hg胁迫对泥蚶体内抗氧化酶系统及MDA含量影响的研究2+2+2+低浓度(1µg/L、3µg/L、6µg/L、9µg/L)Cd、Pb及Hg(0.04µg/L、0.12µg/L、0.36µg/L、1.08µg/L)长期(28d)胁迫能对泥蚶(Tegillarcagranosa)内脏团和鳃两种组织中总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)及丙二醛(MDA)含量造成显著影响。整体上看,短期内(7d-14d)较低的两个浓度组泥蚶变化不大,MDA含量没有显著增加,而较高的两个浓度组的泥蚶体内抗氧化酶活性及M

6、DA含量则在第7d时即发生显著变化。随着攻毒时间的延长,低浓度组抗氧化酶活性及MDA含量也显著增加,并最终与高浓度组一样,抗氧化酶活性被抑制到对照组水平,MDA含量仍持续增加。由此认为,泥蚶体内抗氧化酶活性在一定条件下可以作为水环境中重金属Cd、Pb、Hg污染的生物标志物,但在实际应用中需要考虑到多方面因素(如温度、盐度、pH、生长期、污染物混合效应、污染物浓度、暴露时间)的影响,相比之下,MDA含量可以相对较好地显示污染情况,可以作为水环境污染的良好监测指标。I上海海洋大学硕士学位论文2泥蚶Vg基因cDNA全长克隆及其在Cd胁迫下的表达变化研究先后经过同源克隆及RACE

7、全长扩增,最终得到1411bp的cDNA片段,包含1363个核苷酸的开放阅读框(ORF),编码454个氨基酸。分子量为52356.04Da;估计等电点为9.13,PSORTⅡPrediction在线分析显示第13个和第14个氨基酸之间可能是裂解位点,且第1-13个氨基酸为裂解信号肽(cleavablesignalpeptide)。该片段与其他双壳贝类Vg基因序列比对结果显示,整体上泥蚶Vg序列保守性不高(33-46%),这与其它贝类Vg之间的保守度相似。系统进化树分析显示,泥蚶与贻贝、太平洋牡蛎等贝类的亲缘关系最近,之后为虾蟹

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