cc复合材料表面改性及其细胞毒性的研究

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1、中图分类号墅墨垒：!分类号UDC617硕士学位论文学校代码!Q主三三密级公珏C／C复合材料表面改性及其细胞毒性的研究C／Ccompositematerialsurfacemodificationanditscelltoxicityresearch作者姓名学科专业研究方向学院(系、所)指导教师凌江红临床医学外科学湘雅三医院吴松教授论文答辩日翘善趟答辩委员会主席r1V中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位

2、的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：：鍪二坠皇_日期：也年上月望日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：拙师签名过日期也】年上月型日C／C复合材料表面改性及其细胞毒性的研究摘要目的：本文旨在通过体内、体外细胞实

3、验，对比热解炭涂层炭／炭复合材料(C／C+Pyc)、纯钛(Ti)、羟基磷灰涂层炭／炭复合材料(C／C+HA)三者的细胞毒性的情况及对成骨细胞粘附进行评价、以及三种材料对成骨细胞活性、增殖和分化能力的影响和脱落粉末无表面改性炭炭材料比较表面改性涂层炭炭复合材料植入体内粉末脱落情况，同时，该实验探索炭炭涂层材料作为新型体内植入物的可行性。本课题主要研究用电子显微镜扫描(SEM)、X射线衍射分析仪(XRD)研究了纯钛、羟基磷灰涂层炭／炭复合材料、热解炭涂层炭／炭复合材料三种材料的表面形貌的组成。为进一步的临床应用研究提供前期实验基础，也为c／c表面改性涂层材料作为新型体内植入物的可行性提供一定的实验

4、依据。方法：本课题主要实验根据中华人民共和国国家标准GB／T16886．卜2001的规定，按照外科植入物的生物相容性评价项目进行评价。1．选取12只新西兰大白兔，将脱落粉末无表面改性炭炭材料、解炭涂层炭／炭复合材料两种材料，分别植入臀中肌内，分别观察2、4、8周通过HE染色对以上材料观察粉末脱落程度。2．人的成骨细胞传代培养，待细胞传代培养几乎稳定后，将三种不同金属实验材料与成骨细胞置于一起培养。3．将本课题实验金属材料分成三组，A组(纯钛TI)为阴性对照组；B组HA涂层C／C复合材料(C／C+HA)为阳性对照组；C组热解炭涂层炭／炭复合材料(C／C+Pyc)为实验组各40片，先通过超声波清洗

5、，后用灭菌备用。4．采用人的额骨成骨细胞一AM+P工+DAPI染色试剂的荧光染色对培养细胞染色、采用MTT法对成骨培养细胞的活性测定，来综合整体评价三种材料对人额骨成骨细胞的粘附与增殖影响。5．采用人的额骨成骨细胞肌动蛋白(actin)+B微管蛋白+DAPI的免疫荧光染色、额骨成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性功能的测定，来综合评价细胞的分化与成熟。6．采用RT—PCR检测人的额骨成骨细胞I型胶原蛋白BMP一2、OSTCmRNA表达的相对变化量、同时对各种材料表面的细胞生长通过扫描电镜观察得出结果，来整体评价额骨成骨细胞成骨钙化的能力。7．数据用x±S表示，采用SPSSl8．0统计分析软件对实验

6、数据进行分析，各实验组组间比较采用单因素方差分析(One—wayANOVE)，多个样本均数间的多重比较采用LSD—t检验。P40．05有统计学差异。结果：1．通过HE染色观察以上两种植入体内材料全部在体内原来位置，术中见脱落粉末的无表面改性炭炭材料仍出现严重炭粉脱落，表面改性的热解炭炭／炭涂层复合材料通过加工处理后植入体内可见炭粉脱落情况明显好转。2．人的额骨成骨细胞-AM+PI+DAPI的荧光染色、MTT法成骨细胞活性测定：随着材料一成骨细胞培养时间的延长，B、C各组材料与A组材料相比更有利于人的额骨成骨细胞的增殖，具有统计学意义(P<0．05)；B、C两组材料对人额骨成骨细胞的毒性相差不是

7、很大，没有统计学意义(P>O．05)。3．采用人的额骨成骨细胞肌动蛋白(actin)+B微管蛋白+DAPI的免疫荧光、对人额骨成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性功能测定：随着材料一成骨细胞培养时间的增加，B、C各组材料与A组材料相比更有利于细胞的分化与成熟，具有统计学意义(P<0．05)；B、C两组材料之间对细胞的分化与成熟的作用相差不大，没有统计学意义(P>O．05)。4．采用RT—PCR测定人的