固定化德阿昆哈假单胞菌生产l-丙氨酸的研究

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1、浙江大学硕士学位论文固定化德阿昆哈假单胞菌生产L-丙氨酸的研究姓名：吴薇申请学位级别：硕士专业：生物物理学指导教师：张建国2002.5.1摘要Y440375本文对具有L．天冬氨酸．B．脱羧酶的德阿昆哈假单胞菌(Pseudomonasdacunhae)的培养条件进行了研究，其最佳培养基配方及培养条件为：富马酸O．5％，蛋白胨3％，磷酸二氢钾0．05％，硫酸镁0．01％，pn7．2，30。C下摇瓶培养24-26h。本文着重研究了德阿昆哈假单胞菌(Pseudomonasdacunhae)的固定化细胞技术。结果发现，以K一卡拉胶作为包

2、埋剂、再经两种硬化剂处理得到的固定化细f胞，具有较高的酶稳定性和回收率。(_最高回收率达到88．6％，该固定化细胞在4℃下保存60天，酶活力只下降3．5％。对固定化细胞性质进行的初步研究发现，其最适温度为4000，最适pH为5．0，最适底物浓度范围为66．5～1339／L。底物溶液对固定化细胞具有活化作用j最佳活化条件为：将固定化细胞浸泡在]509／L的底物溶液中，于37"0、120rpm摇床中振荡30h。在温度37℃、底物浓度loOedL的条件下，该固定化细胞在填充床反应器中连续运行20天，测得其半衰期为71天。转化液经提取

3、，获得L。丙氨酸结晶。产品经鉴定，L．丙氨酸含量达到98．61％。关键词：德阿昆哈假单胞菌，K-卡拉胶，L一丙氨酸，L一天冬氨酸一13一脱羧酶，固定化细胞AbstractAprocesstoobtainopticallypureL—alaninehadbeendevelopedusingaL—aspartatebeta—decarboxylase(ADL)一producingbacteriumPseudomonasdacunhae．EffortsweremadetOobtaintheoptimalculturemediuman

4、dtheoptimalcultureconditions．Theresultsweregivenasfollows：fumaricacidO．5％，peptone3％，KH2P040．05％，MgS04O．01％，pH7．2，at30℃ofculturetemperatureand24-26一hourofculturetime．Basedontheaboveresults，amethodforproducingL—alaninefromL—asparticacidusingimmobilizedPseudomonasdacun

5、haecellswasinvestigatedinthisthesis．ThecellswereimmobilizedwithK—carrageenanandtreatedwithtwokindofhardeningagents．88．6％ofyieldofADLactivitywasobtainedandonly3．5％ofADLactivitydecreasedwithin60daysat4℃．Theoptimaltemperature．theoptimalpHvalueandtheoptimalsubstrate(L—a

6、sparticacid)concentrationfortheenzymaticreactionbyADLwere40。C，5．0and66．5-1339／L，respectively．Also，theactivationofthesubstratesolutiononADLactivitywasstudied．ADLactivitysignificantlyincreasedbyculturingtheimmobilizedcellsin150eelsubstratesolutionintherotatoryshakerat

7、37℃for30hours．ApackedbedreactorfilledwiththeimmobilizedcellsWasdevelopedtocontinuouslyproduceL—alaninefromL-asparticacid．Thereactorwith1009／Lsubstratesolutionhadbeenrunningfor20daysat37。C．Thehalf-lifewasthendeterminedas71daysandthecrystalpowdersample，containingmoret

8、han98．61％ofL—alanine．wasobtained．Keywords：Pseudomonasdacunhae，K—carrageenan，L—alanine，L—aspartatebeta—decarboxylase，immobilizedceils⑦浙江大学硕