v-atpase h亚基对东亚飞蝗蜕皮和存活的影响

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1、重庆大学硕士学位论文V--ATPaseH亚基对东亚飞蝗蜕皮和存活的影响姓名：李晨申请学位级别：硕士专业：生物学指导教师：夏玉先20120604重庆大学硕士学位论文中文摘要摘要Vacuolar(H+)一ATPase(V-ATPase)广泛分布在质膜及内膜系统中，是一种多亚基的质子泵。该酶能够水解ATP，转运质子，维持胞质pH平衡，形成跨膜电化学梯度。Vhasfd编码V-ATPase的H亚基，H亚基对V二ATPase正常功能的行使是必需的。有报道表明，沉默V型ATP酶的A或E亚基会对靶标生物产生重要影响。但是目前对H亚基的研究报道是很少的。东亚飞蝗(Locustamigratoriaman

2、ilensis,Meyen)是我国重点防治的一种迁飞性农业害虫，对东亚飞蝗的研究以及对蝗灾的防治措施一直都被人们广泛关注。目前，使用有机磷类杀虫剂仍然是防治东亚飞蝗的主要手段，但长期使用杀虫剂会导致Resistence、Residue、Resurgence(3R)问题的产生。因此，开发低毒性、高效率、无残留、无公害的新型农药已经成为防治农业害虫的重要任务。对东亚飞蝗的基因进行克隆并研究其功能，分析其对东亚飞蝗生长发育是否有重要作用的基因，能否为新型杀虫药物的研发提供靶标的相关课题有重大意义。主要研究结果有：①克隆得到了编码东亚飞蝗V型ATP酶H亚基的基因，Lm—Vhasfd，该基因全长

3、cDNA序列为2018bp，开放阅读框编码515个氨基酸残基。②半定量PCR结果分析表明，在所选取的各个组织中Lm—Vhasfd都有表达，在血淋巴、中肠、躯干和腿组织中高表达，在脂肪体和头组织中表达量相对低。③通过注射特异dsRNA，沉默Lm—Vhasfd的表达，检测V-ATP酶活性及ATP含量，结果显示在干扰3，5，7天有显著差异。④通过RNA干扰沉默Lm—Vhasfd基因的转录水平后，东亚飞蝗的存活率和蜕皮现象与对照组存在差异，实验组的东亚飞蝗在蜕皮过程出现不同程度的缺陷，并且在注射dsRNA11天后，RNAi组的累积死亡率达到96．7％。这与对照组相比是极具显著性的。关键词：V型

4、ATPase，Vhasfd,东亚飞蝗，RNA干扰，dsRNA．重庆大学硕士学位论文英文摘要ABSTRACTVacuolar(H+)一ATPaseisamultisubunitprotonpumpandwidelydistributeintheplasmamembraneandtheendomembranesystem．Vacuolar(H+)-ATPasefunctionsasanelectrogenicpump，transportingprotonsfromthecytoplasmtotheextracellularfluidtogeneratecell．negativemembra

5、nevoltage．TheV-ATPasesubunitH，encodedbyVhasfd,isrequiredforV-ATPaseactivity．IthasbeenreposedthatsilentthesubunitofAorEofV-ATPasewillimpactthetargetorganisms．ButlittleisknownaboutthefunctionofsubunitHonindividualinsects．Theorientalmigratorylocust化．migratoriamanilensis)，amemberoftheorthopteransand

6、arepresentativememberofhemimetabolousinsects，iSoneofthemostimportantagriculturalpeasofprairiesandcroplands．InChina，infestationsofL．migratoriamanilensisareextremelydestructiveandtheyaremainlycontrolledbyorganophosphate(OP)insecticides．However’theinsectshavedevelopedresistancetooP,andsubsequentlNi

7、tsefficiencyhasdecreased．Forthisreason，newcontrolstrategiesoflocustneedtobedeveloped，suchaspesticidesaimedatnewtargets，orthecreationoftransgenicplantsthatexpressdsRNAagainstspecificinsectgenes．Thus，theidentificationofgenesth