轮状病毒g9型(ztr18)灭活疫苗的免疫学初步评价

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1、博士学位论文学校代码：10023学号：B2012018002轮状病毒G9型(ZTRl8)灭活疫苗的免疫学初步评价PreliminaryevaluationofrotavirustypeG9(ZTRl8)inactivatedvaccineimmunologicalresponse所院：医学生物学研究所姓名：肖楠指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：孙茂盛李鸿钧生物化学与分子生物学传染性疫苗研究中国医学科学院／北京协和医学院博士研究生学位论文摘墨脲嘲黝Iit"摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯=!19S中国医学科学院／北京协和医学院博士研究生学位论文三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．431．ZTRl8(G9型)轮状病毒株的传代培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯432．ZTRl8(G9型)轮状病毒基因组聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯433．RT-PCR一测序检测ZTRl8(G9型)轮状病毒收获液VP7基因型稳定性⋯⋯⋯⋯⋯444．ZTRl8(G9型)轮状病毒株滴度检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯455．ZT

3、Rl8(G9型)轮状病毒株超滤、纯化及灭活疫苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯476．ZTRl8(G9型)轮状病毒株灭活疫苗盲传⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯497．ELISA检测轮状病毒灭活疫苗制备过程抗原量变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯528．Lowary法检测灭活疫苗蛋白含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．529．ZTRl8(G9型)轮状病毒株形态学观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．541．ZTRl8(G

4、9型)轮状病毒株的培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯542．ZTRl8(G9型1轮状病毒灭活疫苗制各及相关检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56五、小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58第三部分两种单价灭活疫苗及双价灭活疫苗免疫学评价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．59一、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．591．细胞系、毒株和实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯592．主要试剂及耗材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯593．主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．604．主要分析用软件网站⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．611．轮状病毒灭活疫苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6l2．轮状病毒灭活疫苗免疫小鼠⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯613．ELISA检定免疫小鼠后血清轮状病毒特异性IgG抗体水平⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6

6、34．FFIT比较三种疫苗诱导的血清抗体对不同轮状病毒中和效价的差别⋯⋯⋯⋯⋯64三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．661．ELISA检定灭活疫苗免疫小鼠效果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．662．FFIT比较三种疫苗诱导的血清抗体对不同轮状病毒中和效价的差别⋯⋯⋯⋯⋯69四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．891．实验动物模型特点分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯892．结果分析中统计方法的

7、应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯893．两种单价和两价灭活疫苗最佳免疫剂量的评价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯904．比较三种疫苗对不同病毒株的中和效价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91五、小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．92展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．93参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．94中国医学科学院／北京协和医学院博士研究生学位论文附录

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一、缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯二、主要溶液配方⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯独创性声明．．．．，．，．．100⋯⋯⋯100⋯⋯⋯101⋯⋯⋯104⋯⋯．．．105⋯⋯⋯106中国医学科学院／：IL京协和医学院博士研究生学位