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1、川贝母ChuanbeimuFRITILLARIAECIRRHOSAEBULBUS本品为百合科植物川贝母FritiLlariacirrhosaD.Don、暗紫贝母FritiLlariaunibracteataHsiaoetK.C.Hsia、廿肃贝母Frit订lariaprzewal3,kiiMaxim,>梭砂贝母FritiLlariadelavayiFranch.>太白贝母FritillariataipaicnsisP.Y.Li或瓦布贝母Frit订lariaunibracteataHsiaoetK.C・Hsiavar.wabuensis(
2、SY.TangetSC.Yue)Z.D.Liu,S.WangetS.C.Chen的干燥鳞茎。按性状不同分别习称“松贝”、“青贝”、“炉贝”和“栽培品”。夏、秋二季或积雪融化后采挖，除去须根、粗皮及泥沙，晒干或低温干燥。【性状】松贝呈类圆锥形或近球形，高0.3〜0.8cm,直径0.3〜0.9cm0表面类白色。外层鳞叶2瓣，大小悬殊，大瓣紧抱小瓣，未抱部分呈新月形，习称“怀中抱月”；顶部闭合，内有类圆柱形、顶端稍尖的心芽和小鳞叶1〜2枚；先端钝圆或稍尖，底部平.微凹人，中心有1灰褐色的鳞茎盘，偶有残存须根。质硬而脆，断面白色，富粉性。气微，
3、味微苫。青贝呈类扁球形,高0.4〜1.4cm,直径0.4〜l・6cm。外层鳞叶2瓣，大小相近,相对抱合，顶部开裂，内有心芽和小鳞叶2〜3枚及细圆柱形的残茎。炉贝呈长圆锥形，高0.7〜2.5cm,直径0.5〜2.5cm。表而类白色或浅棕黄色，有的貝棕色斑点。外层鳞叶2瓣，大小相近，顶部开裂而略尖，基部稍尖或较钝。栽培品呈类扁球形或短圆柱形，高0.5〜2cm,直径1〜2.5cm。表面类白色或浅棕黄色•稍粗糙，有的具浅黄色斑点。外层鳞叶2瓣，大小相近，顶部多开裂而较平。【鉴别】(1)本品粉末类白色或浅黄色。松贝、青贝及栽培品淀粉粒其多，广卵形
4、、长圆形或不规则圆形，有的边缘不平整或略作分枝状，直径5〜64um,脐点短缝状、点状、人字状或马蹄状，层纹隐约可见。表皮细胞类长方形，垂周壁微波状弯曲，偶见不定式气孔，圆形或扁圆形。螺纹导管直径5〜26mmo炉贝淀粉粒广卵形、贝壳形、肾形或椭圆形，直径约至60um,脐点人字状、星状或点状，层纹明显。螺纹导管和网纹导管直径可达64umo(2)取本品粉末10g,加浓氨试液10ml,密塞，浸泡1小时，加二氯甲烷40ml,超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5皿使溶解，作为供试品溶液。另取贝母索乙对照品，加甲醇制成每1ml各含lmg的
5、溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验.吸取供试品溶液1〜6卩川1、对照品溶液各2U1,分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液-水（1&2：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以稀碘化祕钾试液和亚硝酸钠乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（3）聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性方法。模板DNA提取取本品0.lg,依次用75%乙醉lnil、灭菌超纯水1ml淸洗，吸干表面水分,置乳钵中研磨成极细粉。取20mg,置1.5ml离心管中,用新型广谱植物基因组DNA快速
6、提取试剂盒提取DNA［加人缓冲液AP1400u1和RNA卿溶液（10mg/ml）4］i1,涡漩振荡，65°C水浴加热10分钟，加入缓冲液AP2130U1,充分混匀，冰浴冷却5分钟，离心（转速为每分钟14000转）10分钟；吸取上淸液转移入另一离心管屮，加人1・5倍体积的缓冲液AP3/E,混匀，加到吸附柱上，离心（转速为每分钟13000转）1分钟，弃去过滤液，加入漂洗液700u1,离心（转速为每分钟12000转）30秒，弃去过滤液；再加入漂洗液500u1,离心（转速为每分钟12000转）30秒，弃去过滤液;再离心（转速为每分钟13000转
7、）2分钟，取出吸附柱，放入另一离心管中，加入50y1洗脱缓冲液，室温放置3〜5分钟，离心（转速为每分钟12000转）1分钟，将洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，离心（转速为每分钊•12000转）1分钟］，取洗脱液，作为供试品溶液,置4°C冰箱中备用。另取川贝母对照药材O.lg,同法制成对照纱材模板DNA溶液。PCR-RFLP反应鉴别引物：5'CGTAACAAGGTTT-CCGTAGGTGAA3'和5'GCTACGTTCTTCATCGAT3'。PCR反应体系：在200u1离心管中进行，反应总体积为30m1,反应体系包括10XPCR缓冲
8、液3卩1,二氯化镁（25mmol/L）2.4u1,dNTP（10mmol/L）0.6Pl,鉴别引物（30UU1O1/L）各0.5u1,高保真TaqDAN聚合酶（5U/u1）0.2u1,模板1u1,无菌超纯水
