产ε--聚赖氨酸菌种的筛选及活性研究

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1、北京化工大学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：j4L日期：关于论文使用授权的说明学位论文作者完全了解北京化工大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属北京化工大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许学

2、位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。保密论文注释：本学位论文属于保密范围，在一年解密后适用本授权书。非保密论文注释：本学位论文不属于保密范围，适用本授权书。作者签名：导师签名：日期：矽／妒．衫．夕多二学位论文数据集中图分类号及2心学科分类号≥如。达论文编号／面／咖f争lf钐密级l办是●学位授予单i0010学位授予单位名北京化工大学作者姓名刘欣学号2011201190获学位专业微生物与生化药学获学位专业代码

3、∞、o∑课题来源癸捉孜丑研究方向微生物论文题目产

4、e一聚赖氨酸菌种的筛选及活性研究关键词聚赖氨酸、菌种筛选、活性研究、产量提高论文答辩日矽J争．吐．攻论文类型应用研究学位论文评阅及答辩委员会情况姓名职称工作单位学科专长指导教师咧¨敖授越南他上搏亿薄正的著_评阅人1嘛k禹l数控“．岛在．7久舡掀土为趴评阅人2睦荟娴极超诸尘久牡詹．尊IL晌幸V’一’评阅人3评阅人4评阅人5答辩委员会主阖受便数．授州京化jLl人单制‰。赫崩糊答辩委员I炜黝救搬

5、lI刍红．7夫昏褊物戡I’答辩委员2陈圯引锻一垃厦名么．2太．如扭荫救答辩委员3颤套羹西技挺厦．东奋．L久曩馏磊)-2．-答辩委员4陈戈。西籀

6、轻瞄么．L博幸饲彼．瘅I一答辩委员5注：一．论文类型：1．基础研究2．应用研究3．开发研究4．其它二．中图分类号在《中国图书资料分类法》查询。三．学科分类号在中华人民共和国国家标准(GB／T13745—9)《学科分类与代码》中查询。四．论文编号由单位代码和年份及学号的后四位组成。摘要产￡．聚赖氨酸菌种的筛选及活性研究聚￡．赖氨酸(￡．PL)是由L．赖氨酸通过￡．氨基和0【．羧基之间的酰胺键聚合而成，是一种胞外次级代谢产物。聚￡．赖氨酸能够抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌，甚至能够抑制病原体的生长。具有无毒、抑菌性好、水溶性好、可生物

7、降解等优点，是理想的生物防腐剂。本课题主要立足产￡．赖氨酸菌种的筛选，菌种发酵液中产物的提取、纯化，产￡．赖氨酸菌种鉴定以及产量提高几方面进行研究。本课题的菌种主要从采自北京各地、泰安、廊坊、宣化、西安、杭州、南京、昆明等地的土壤中筛选出产聚赖氨酸的菌种，并通过菌种产物与带电荷染料的排斥作用、碘化铋钾试剂检测、TLC、HPLC等手段对其进行产物鉴定，确定菌种产物中含有￡．PL。本实验是采用阳离子交换层析柱对产￡．赖氨酸菌种发酵液进行分离纯化后进行产物鉴定，最终确定24号菌种能够产￡一PL。通过16SrDNA的提取以及显微镜下菌落形

8、态观察，确定此菌种为白色链霉菌。用滤纸片法测24号发酵液产物的抑菌性，表明产物对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有抑菌性。使用紫外分光光度计法测24号发酵液中￡．PL的产量，约为O．19g·L-1。以24号菌种为出发菌种，对其进行生物、物理、化学综合诱变。选用多聚赖氨酸和甘氨酸作为抗性平板，利用紫外照射与硫酸二乙酯北京化工大学硕士学位论文对24号菌株进行复合诱变处理，对￡．聚赖氨酸高产菌种进行选育，筛选出一株产量提高的菌株，产量提高约105％，产量为O．39g·L～。复合诱变之后，进行培养基组分的优化。目前，很多研究链霉菌发酵的都是使

9、用M3G培养基，以葡萄糖为碳源，酵母膏为有机氮源，硫酸铵为无机氮源。本节在M3G培养基的基础上对其进行改善，最终确定甘油作为碳源的产量比葡萄糖作为碳源的产量高，最终产量达O．41g·L～。最后，研究发酵培养基的初始pH值对菌种产率的影响，确定初始pH为6．8时为最佳pH。关键词：￡一聚赖氨酸，菌种筛选，分离纯化，抑菌性，产量提高Screeningbacteriaproducing￡．PLandactivityresearchABSTRACTPoly-e-lysine(￡-PL)isanunusualcationic，natural

10、lyoccurringnomopolyamidemadeofL-lysine，havingamidelinkagebetween￡。amlnoand泓carboxylgroups．￡一PLcaninhibitthegrowthofgram。posi