烟曲霉rho1基因敲除及其功能的初步研究

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1、中图分类号9_932一UDC皿硕士学位论文学校代码!Q§塑密级公开烟曲霉rhoI基因敲除及其功能的初步研究DeletionofrholgeneandpreliminarycharacterizationonitsfunctioninAspergillus一●lumlgatus作者姓名：学科专业：研究方向：学院：指导教师：副指导教师：论文答辩日期p小．她韩改革生物学微生物学基础医学院韩黎研究员无’一臌逝中南大学2013年5月原创性声明，’’本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导卜进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含

2、其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：猫日期：迎屋年姐型日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。：时工月烟曲霉rhol基因敲除及其功能

3、的初步研究摘要：作为临床重要致病真菌之一，烟曲霉可引发侵袭性曲霉病，病死率很高，但其具体致病机制仍不清楚。Rhol是B．1，3．葡聚糖合成酶的调节亚基，调控烟曲霉细胞壁主要成分B一1，3．葡聚糖的合成。由于烟曲霉rhol基因敲除株难以获得，限制了对其功能的深入研究。本论文利用同源重组技术成功获得了烟曲霉AF293的rhol基因敲除株(Arh01)和砌D』基因回补株(rholC)。Arhol在37℃几乎不能生长，这与其他曲霉的rhol基因敲除株明显不同。在30℃或32℃Arhol可以生长，但其菌丝放射性生长速率远低于野生株，而在25℃其生长速率略高于野生株；4砌oJ菌落形态

4、与野生株有明显差异，其边缘比野生株光滑，产孢明显减少，无典型分生孢子头；菌丝顶端变薄，复合体消失，菌丝干重下降。在应激反应方面，Arhol抗高浓度细胞壁完整性干扰剂和抗氧化应激的能力明显强于野生株，但对渗透压和碱性环境的敏感性与野生株无差别；另外，Arhol自身ROS产生能力显著高于野生株，这种增高受到细胞壁完整性干扰剂的抑制。rhol基因缺失对烟曲霉粘附肺II型上皮细胞并诱发宿主细胞内ROS生成的能力无影响，但显著抑制烟曲霉侵染宿主细胞。在上述性状和生理功能方面，rholC与野生株无显著差异。初步判断，rhol基因可能在烟曲霉温度适应性、细胞壁完整性、氧化应激以及侵袭宿

5、主等方面发挥重要作用，其具体调控机制亟待深入研究。论文中包含图22幅，表1个，参考文献6l篇。关键词：烟曲霉；Rhol；基因敲除；细胞壁完整性：侵染分类号：Q932DeletionofrholgeneandpreliminarycharacterizationonitsfunctioninAspergillusfumigatusAbstract：Asoneofthemostimportantfungalpathogens，Aspergillusfumigatuscausesinvasiveaspergillosiswithveryhighmortality．Rholisa

6、regulatorysubunitofp—l，3一D—glucansynthasethatgeneratecellwallp一1,3-D—glucans．However,thereisquitelimiteddataaboutthefunctionofrholgeneinA．fumigatusduetotheabsenceofrholgene-nullmutantofA．fumigatus．Inthisstudytherhol-deletedstrain(Arh01)andtherhol—genecomplementedstrain(rholC)ofA。fumigatus

7、AF293weresuccessfullyconstructedwithhomologousrecombination．ItwasfoundthatArholwasnotabletogrowat37℃，whichwasquitedifferentfromtherhol—gene—deletedstrainsinotherAspergillus．Thedrholmutantcouldgrowat30℃butitsradialgrowthratewasmuchlowerthanthatofwild—typestrain；incon