cathepsin l在x射线诱导的人脑胶质瘤u251细胞侵袭中的作用

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1、硕士学位论文论文题目CathepsinL在X射线诱导的人脑胶质瘤U251细胞侵袭中的作用研究生姓名季文君指导教师姓名梁中琴专业名称药理学研究方向肿瘤药理论文提交日期2013年4月CathepsinL在X射线诱导的胶质瘤U251细胞侵袭中的作用中文摘要CathepsinL在X射线诱导的人脑胶质瘤U251细胞侵袭中的作用中文摘要目的：研究溶酶体组织蛋白酶L(CathepsinL)在X射线诱导的人脑胶质瘤侵袭迁移中的作用及调控机制。方法：采用CathepsinL特异性抑制剂Z-FY-CHO或shRNA干扰的方式降低U251细胞中Catheps

2、inL的表达，并联合X射线处理细胞，通过细胞划痕实验及Matrigel侵袭实验检测U251细胞的迁移、侵袭能力的改变；Westernblot和免疫荧光法检测各处理组细胞中CathepsinL的变化及侵袭相关蛋白RhoA、CDC42、MMP-2、MMP-9、CXCR4、CCR7的表达；Rho/CDC42ActivationAssay的方法测定细胞骨架蛋白RhoA及CDC42的活性蛋白；鬼笔环肽染色及免疫荧光法观察细胞骨架结构的改变。结果：X射线能明显增加U251细胞CathepsinL蛋白的表达，并增强细胞的迁移及侵袭能力。Z-FY-CH

3、O及CathepsinLshRNA可减少由X射线诱导的CathepsinL的表达及核转位、抑制细胞的迁移及侵袭能力、降低RhoA和CDC42活性蛋白表达以及减弱MMP-2、MMP-9、CXCR4和CCR7蛋白表达，并能影响细胞的伸展能力和应力纤维的形成及运动能力。结论：CathepsinL对X射线诱导的胶质瘤U251细胞的侵袭能力具有一定调控作用，其分子机制可能涉及对细胞骨架蛋白、基质金属蛋白酶以及趋化因子受体的蛋白表达的调控。关键词：CathepsinL；X射线；肿瘤侵袭；胶质瘤细胞作者：季文君指导老师：梁中琴IAbstractCat

4、hepsinLinvolvedinX-ray-inductedcellinvasionofhumangliomaU251cells.CathepsinLinvolvedinX-ray-inductedcellinvasionofhumanbraingliomaU251cellsAbstractAim:Inthisstudy,wewouldinvestigatetheeffectandthemechanismsofcathepsinLinthehumanbraingliomainvasioninducedbyX-ray.Methods:C

5、athepsinLexpressionwassuppressedbyaspecificinhibitorZ-FY-CHOorashorthairpinRNA.U251cellmigrationinducedbyX-rayswasmeasuredinvitrobywoundhealingassayandcellinvasiondetectedbytranswellinvasionassay.Westernblottingandimmunofluorescenceassaywereusedtodetecttheexpressionlevel

6、softheproteins(cathepsinL,RhoA,CDC42,MMP-2,MMP-9,CXCR4andCCR7)relatedtotheinvasioninU251cells.ActivationofRhoAandCDC42wasmeasuredwithRhoActivationAssayKitandCDC42ActivationAssayKit.FITC-Phalloidinfluorescentstainingandimmunofluorescenceassaywereadoptedtoobservetheactinre

7、modelingofU251cells.Results:X-rayirradiationimprovesthepotentialofhumangliomaU251cellsforcellularmigrationandinvasion;inhibitionofcathepsinLexpressionbyusingaselectiveinhibitorofcathepsinL,Z-FY-CHOorcathepsinLshRNAcanunderminetheabilityofX-ray-inducedcellmigrationandinva

8、sion.Z-FY-CHOorcathepsinLshRNAcouldalsoinhibitX-ray-inducedproteinexpressionandnucleartranslocationofCa