基于代谢组学整体表征中药药性及性效关系

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1、第32卷第6期云南中医学院学报V01.32NO.62009年l2月JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine】2.2oo9基于代谢组学整体表征中药药性及性效关系刘树民,卢芳,董培良,陈平平,柳长凤(黑龙江中医药大学中医药研究院,黑龙江哈尔滨150040)[摘要]目的:研究药性对证候整体代谢网络影响的生物学机制,阐明药性与功效之间的必然联系,初步揭示中药药性的科学内涵。方法:应用代谢组学方法和主成分分析方法,运用UPLC—Q—TOF/MS技术手段,通过研究热病证候本身及苦寒中药黄连和温热药高良

2、姜对比干预热病证候模型,来探讨中药性味与药效的相关性。结果:在主成分得分图中造模后大鼠尿液代谢物组发生变化且被明显分为两类,这从体内微观角度表征了空白和模型组大鼠代谢网络的异同。给予黄连后大鼠尿液中的代谢物在主成分得分图上的落点无离散分类,实验结果表明黄连对热病证候具有治疗作用;给予高良姜后大鼠尿液中的代谢物在主成分得分图上与空白组不能聚于一类,表明高良姜对热病证候不具有治疗作用。实验结果表明代谢组学可用于中药干预作用研究,亦可以表征寒热药性。结论:本课题为中药传统药性理论的研究提供了新的思路、方法和技术手段,对于揭示中药药性理论的科学内涵具有重大意义。

3、[关键词]中药药性理论;代谢组学;性效关系;中图分类号:R285.1文献标识码:A文章编号:1000-2723(2009)06--0001--05中药是个成分众多的黑色分析体系,传统的分阵列检测器一柱温箱);美国MicromassQ—TOF析技术和仪器设备不能从整体上有效表征中药众多micro四极杆一飞行时间质谱)(电喷雾离子源一成分与机体的作用机制,单纯用简单、直观、线性正、负离子扫描方法一Lockspray);MassLynxV4.1的方法难以阐明中药药性的复杂性。因此,我们亟工作站;KDC一160HR高速冷冻离心机(科大创需发展一种针对复杂分析对象

4、的非线性研究方法,新股份有限公司中佳分公司);KQ一50B超声波清以生物体内众多生物指标为研究对象,综合运用现洗器(昆山市超声仪器有限公司)。代研究技术,才能从整体上阐明中药药性实质。代1.2药品与试剂谢组学作为一种基于全局观点的整体性研究方法,黄连(鸡爪连),产地四川I;经黑龙江中医药是通过研究外源物质对体内代谢所产生的整体效大学中医药研究院刘树民教授鉴定为毛茛科(Ra—应,来研究药物对机体所形成的生化物质的总体代nuneulaeeae)植物黄连(CoptischinensisFranch)谢调控作用,其具有不破坏内环境、整体性、灵敏的干燥根茎。高良姜

5、,产地广西;经黑龙江中医药度高的特点[1]。它更能够反映机体真实状态、代大学中医药研究院刘树民教授鉴定为姜科植物高良表机体整体机能,具有与中医治疗疾病的整体观、姜AlpiniaoficinarumHance的干燥根茎。辨证观相一致的特点。故本课题探讨代谢组学方法乙腈为色谱级,美国天地公司;娃哈哈纯净引人中药药性理论研究的可行性。水,再经本室Milli—Q纯水机制备;甲酸色谱级,1实验仪器及材料美国霍尼韦尔公司;脑啡肽,SIGMA公司;甲醇1.1仪器分析级;异丙醇分析级;氢氧化钠分析级;高活性美国WatersAequityⅢUPLC液相色谱仪(四干酵母(安

6、琪酵母股份有限公司)。元梯度泵一在线真空脱气机一自动进样器一二极管1.3动物基金项目:国家重点基础研究发展计划973计划(No:2007CB512608)收稿日期:2o09—11-11作者简介:刘树民(1963~),男,黑龙江省桦南县人,教授,博士生导师,主要从事中药药性理论及药效物质基础研究。l2009正云南中医学院学报第32卷Wistar大鼠,雄性,清洁级,体重为(200±表1梯度洗脱程序表20)g(北京维通利华实验动物技术有限公司提供),大鼠于室内保持12h光照,12h避光循环饲养,给予标准饲料和饮用水,且控制室内温度为(22±1)℃、相对湿度在4

7、0%左右。1.4样品的采集与制备大鼠适应环境3d后,放人代谢笼中适应5d,每日早晚测量体温,连续3d,选取基础肛温在38.5~39.5℃,波动在0.5℃以内者纳入实验;随机分为空白组、给予生理盐水的对照组、给予黄连水煎液的实验组(高剂量组2.4kg体重、中剂量组1.2kg体重、低剂量组0.6g/kg体重)和给予3.0V;离子源温度为110℃;脱溶剂温度为300~(2;高良姜水煎液的实验组(1.2g·kg体重)。于造脱溶剂气流量正离子扫描为600L/h,负离子扫描模前3d用代谢笼收集24h尿液,每日上午8点收为500L/h;锥孑L气流量为100L/h;碰撞

8、能为3V,集1次,连续3d,尿液置于冰中保存;除空白组碰撞气为氩气,微通道板电压

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