引导骨再生壳聚糖-胶原可吸收膜的研制及其物理性能、生物相容性的研究

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1、浙江大学硕士学位论文引导骨再生壳聚糖--胶原可吸收膜的研制及其物理性能、生物相容性的研究姓名：苗卓伟申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：平飞云；董研201204浙江人学硕I：学位论文中文摘要引导骨再生壳聚糖．胶原可吸收膜的研制及其物理性能、生物相容性的研究浙江大学医学部硕士研究生导师指导导师口腔医学系苗卓伟平飞云教授主任医师董研副教授主任医师中文摘要目的：引导骨再生技术(GuidedBoneRegeneration，GBR)的出现，为局部牙槽骨缺损的患者行种植义齿修复提供了可能。目前，GBR已成为一

2、种常规的牙种植辅助技术，可改善缺牙区骨组织的质量和数量，以满足种植体的植入条件。而屏障膜在GBR技术中起着重要作用。本研究将壳聚糖和胶原以不同比例混合，通过机械性能测试、体外细胞增殖实验和动物体内埋植实验对其进行物理性能，生物相容性及降解性研究，以期将自主研发的壳聚糖．胶原可吸收膜应用于牙种植引导骨再生技术。方法：(1)将2％的低分子量壳聚糖(Mw50，000~190，ooo)冰乙酸溶液与o．3％的胶原水溶液以体积比2：l，1：l、l：2(定义为A，B，C组)混合，加入1％的NaOH溶液调节混合液至pH呈中性

3、，混合液经4℃静置过夜除气泡，．20℃冷冻24h和-80℃预冻12h后，采用冻干法制备A、B、C三组壳聚糖．胶原膜。通过拉伸实验和压汞实验研究膜的物理性能。用扫描电镜观察比较冻干膜与Bio．Gide膜表面形态的差异．(2)将2％的低分子量壳聚糖冰乙酸溶液(CHS．L)、1％的中分子量壳聚糖(MWIlI浙江人学硕士学位论文中义摘要190，000~310，OOO)冰乙酸溶液(CHS．M)及O．1％的胶原(MW300，000)冰乙酸溶液(COL)分别透析至溶液pH呈中性。分别将CHs．L和CHS．M与COL以2：1

4、和4：1的体积比混合，得到四种混合液。混合液经4℃静置过夜除气泡、．20℃冷冻48h和一80℃预冻24h后，采用冻干法制备壳聚糖．胶原膜。将膜裁剪至所需大小后，独立包装Eo灭菌。(3)将灭菌膜片浸入配好的细胞培养液中，膜表面积与培养液比例为6cm2／ml，用膜浸提液和常规细胞培养液培养MC3T3一El细胞，采用MTT实验评价膜对细胞增殖活性的影响。(4)将灭菌膜片植入8只新西兰兔的背部皮下组织内，手术后l周、2周、4周、8周各随机处死2只动物，取出剩余膜材料。通过计算膜植入前后的质量差测定膜在动物体内的降解率

5、。结果：(1)低分子量壳聚糖冰乙酸溶液与胶原水溶液混合制备的A(2：1)、B(1：1)、C(1：2)三组冻干膜，以2：l和1：1比例制备的膜成膜效果较好，以l：2比例制备的膜成膜效果较差(不进行物理性能评价)．拉伸实验结果表明，以2：l比例制备的膜机械性能优于l：l比例制备的膜；压汞实验显示，以2：l和l：1比例制备的膜存在广泛的孔隙，孔隙率分别为89．41％和83．92％；通过扫描电镜观察，2：1和l：l比例制备的两组冻干膜孔隙均较Bio—Gide膜大．(2)2％的低分子量壳聚糖冰乙酸溶液、l％的中分子量壳

6、聚糖冰乙酸溶液和O．1％的胶原冰乙酸溶液分别透析至溶液呈中性后，未见絮状物质析出．壳聚糖溶液可与胶原溶液均匀混合，混合液经真空冻干可制成膜。两种中分子量壳聚糖冻干膜的厚度和密度，均大于低分子量壳聚糖制备的冻干膜。(3)中分子量壳聚糖制备的两种冻干膜，对小鼠MC3T3．E1细胞增殖无抑制．壳聚糖与胶原体积比为4：l时，其浸提液对MC3T3．E1细胞的增殖表现出显著的促进作用，特别是从第4天开始，oD4∞值明显高于对照组(氏O．01)：壳聚糖与胶原体积比为2：l时，其浸提液对MC3T3．El细胞增殖无显著影响，O

7、D490值仅稍高于Ⅳ浙江大学硕{二学位论文中文摘要对照组(P>O．05)。(4)皮下埋植实验显示，两种中分子量壳聚糖．胶原冻干膜植入动物皮下组织后未见明显的炎症反应．两种壳聚糖．胶原冻干膜在动物体内可降解吸收．8周时，壳聚糖．胶原冻干膜(2：1和4：1)的降解率分别为43．83％和26．45％，但未降解的膜材料已破碎或溶胀呈浆状。结论：(1)壳聚糖和胶原混合制备的冻干膜有较好的物理性能和生物相容性．(2)中分子量壳聚糖(Mw190，OOo~3lo，Ooo)和胶原的冰乙酸溶液分别透析至中性后以体积比4：1混合，

8、经真空冻干制备的复合可吸收膜，具有良好的成膜性、生物相容性及生物降解性，具备了应用于引导骨再生技术的基本条件．关键词：壳聚糖胶原引导骨再生可吸收生物膜物理性能生物相容性V浙江大学硕t学位论文英文摘要Evaluations0nphysicalpropertyandbiologicalcompatibiIityofanovelabsorbablechitosan—coUagenmembranef．org