全雌鲤鱼育种技术及性别相关分子标记研究

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1、南京农业大学硕士学位论文全雌鲤鱼育种技术及性别相关分子标记研究姓名：司伟申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：傅洪拓20060601中文摘要全雌鲤鱼育种技术及性别相关分子标记研究摘要鲤鱼的全雌育种具有重要的学术价值和显著的经济价值。人工诱导雌核发育与性逆转相结合是全雌鲤鱼育种的主要途径，其中雌核发育鱼与杂交鱼的鉴别是该途径的关键技术。全雌鲤鱼育种的另一技术路线是先将鱼苗混合转性，然后通过性别相关分子标记鉴别出假雄鱼，前提是找到可用于鉴定遗传性别的·眭别相关DNA分子标记。建鲤是我国20世纪80年代末育成的鲤鱼优良品种，

2、目前已成为我国鲤鱼养殖的主导品种．本文以建鲤为材料进行全雌鲤鱼育种技术及性别相关分子标记研究，具体如下：以紫外线灭活的异源精子(红鲫精子)诱导建鲤进行人工雌核发育，并采用RAPD技术对雌核发育后代进行分析，以鉴别雌核发育鱼。人工雌核发育共获得子一代鱼241尾，根据形态特征分为I型(建鲤体型)和lI型(鲤鲫杂种体型)，各取5尾进行RAPD分析．实验筛选了10种随机引物，共扩增得到建鲤的特征条带35条，红鲫的特征条带31条，二者共有条带26条。扩增结果发现，5尾I型鱼有4尾仅出现建鲤特征条带，未发现红鲫特征条带，为雌核发育鱼，另

3、一尾I型鱼绝大多数扩增带为建鲤特征带，但引物OPYl2扩增出一条分子量约为1220bp的红鲫特征带，推测系部分精子DNA片段渗入卵核所致，属于部分杂交鱼；全部II型鱼既有建鲤特征条带，也出现红鲫特征条带，为鲤鲫杂交鱼。结果表明，RAPD技术可高效、准确地鉴别出异源精子诱导的雌核发育鱼，不仅具有理论意义，而且有助于建立标准化的人工雌核发育技术，提高雌核发育鱼筛选的准确度和效率，促进雌核发育技术在鱼类育种中的应用．采用RAPD和AFLP技术，比较分析已知性别的雌雄建鲤的DNA差异，筛选性别相关的DNA分子标记。RAPD分析选用了

4、80个随机引物对建鲤雌雄群体样本进行扩增，从中筛选出条带稳定清晰的67个引物，其中有18个引物可以扩出群体水平的性别差异分子标记，但未发现个体水平的性别差异分子标记。AFLP分析从64对引物组合中筛选出9对引物对雌雄个体进行扩增，电泳图谱条带丰富，多态性位点比例高。通过对反应条件的优化处理，在引物E—ACG／M—CAA的扩增图谱中找到一条雌性特异的DNA条带，分子量约323bp，雄性个体均无此条带，初步发现了雌雄之间的遗传差异，可为建鲤遗传性别的鉴定提供参考；同时发现某些位点在雌性和雄性个体出现的比例存在很大差异，推测与遗传

5、性别有一定的关联。另一方面，实验中积累了AFLP分析的大量数据，9对选择性扩增引物共扩增出1097个片段，其中264个片段(24．1％)为所有雌雄个体共有条带，其余833个(75．9％)为多态性片段，片段大小在中文摘要50—450bp之间。每对引物检测出的位点数从104—134个不等，平均121．9个，多,54立-点比例占69．0％．92．3％。作为建鲤的遗传背景资料，有关数据可用于建鲤种质标准的建立，为建鲤保种和进一步选育改良提供参考。关键词：鲤鱼；鲫鱼；雌核发育；RAPD；AFLP；分子标记V全雌鲤鱼育种技术及性别相关分

6、子标记研究STUDIESONALL．FEMALECOMMONCARPBREEDn、丁GANDSEX—RELATEDDNAⅣ【ARKERABSTRACTTheall-femalecommoncarpbreedingissignificantinacademicandeconomicvalue．Themajorwayofall—femalebreedingistocombineartificialgynogenesiswithSeXreversal．inwhichthekeytechniqueistheidentificatio

7、nbetweengynogenesisfishandhybridindividuals．Anotherwayistotreatmixedpopulationofmaleandfemalewi血testosteronefirstly，andthenidentifythepseudo-malebysex-relatedDNAmarker．Thepreconditionistofindsex—relatedDNAmarker．Jiancarp，withexcellenteconomictraits，isanextensivelyc

8、ulturedvarietyofcommoncarpinChina．Asaresult，Jiancarpwaschosenasexperimentalmaterialinthispaper．ArtificialgynogenesisofJiancarp(CyprinuscarpioVCIE