几种主要海洋经济帘蛤种质鉴定及种群遗传结构研究

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1、南京农业大学博士学位论文几种主要海洋经济帘蛤种质鉴定及种群遗传结构研究姓名：程汉良申请学位级别：博士专业：水生生物学指导教师：夏德全;吴婷婷20060601中文摘要几种主要海洋经济帘蛤种质鉴定及种群遗传结构研究摘要1．4种帘蛤科贝类同工酶研究采用不连续垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对文蛤(MeretrixmeretrixL．．1758)、青蛤(CyclinasinensisG，1791)、硬壳蛤(MercenariamercenariaL．，1758)和菲律宾蛤仔(Ruditapes肿ilippinarumA．，1850)的4种组织(肝、

2、鳃、后闭壳肌和外套膜)的酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)舜口超氧化物歧化酶(SOD)同工酶进行了研究。结果表明，不同帘蛤的同工酶谱有明显的差异；同种帘蛤不同组织间的EST和MDH同工酶有一定的组织特异性；EST扣MDH同工酶位点丰富，可用于不同物种的鉴定；肝、鳃EST和闭壳肌MDH酶活性较高，是进行同工酶分析的理想材料。对硬壳蛤5种组织(足、外套膜、闭壳肌、鳃和肝)的酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)和乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行了比较研究，并对酶谱表型及位点表达进行了分析。结果表明，硬壳蛤上述组织的EST和MDH同工酶存在不

3、同程度的组织特异性，而LDH没有组织特异性。在EST酶谱中，肝组织染色最深，说明其EST活性最高，这与肝脏是重要的消化腺和解毒器官相适应。在MDH酶谱中发现了s-MDH和r11．MDH所形成的谱带，闭壳肌的MDH谱带染色很深，这与肌肉需要由三羧酸循环提供大量ATP相适应。2．4种帘蛤群体遗传多样性和种间关系及文蛤4个地理种群遗传结构的f^同P分析利用荧光标记扩增片段长度多态性(fAFLP)技术对4种帘蛤(文蛤、青蛤、菲律宾蛤仔和硬壳蛤)的群体遗传多样性和种间关系进行了研究。选择EcoRI／MseI进行酶切，使用6个E+3／M+3引物组合进

4、行扩增，共获得1096个位点，多态位点比率95．1‰片段长度50．456bp。其中，文蛤、青蛤、菲律宾蛤仔和硬壳蛤分别得到681、715、702和694个位点，各物种相应的多态位点比率为76．8％、81．7％、83．0％和75．1％，得到17个物种特异性位点，可作为4物种特征标记。分析了群体遗传相似系数和遗传多样性指数以及种问遗传相似系数。结果表明，硬壳蛤群体遗传相似系数最高(0．6709)，遗传多样性指数最低(O．2360)；菲律宾蛤仔群体遗传相似系数最低程汉良几种主要海洋经济帘蛤种质鉴定及种群遗传结构研究(0．5925)，遗传多样·l

5、生指数最高(0．2618)．根据遗传相似系数采用UPGMA法构建了4物种的聚类图，表明文蛤与菲律宾始z,47遗传关系最近，青蛤与其他3物种遗传关系较远。使用3个E+3／M+3引物组合，对连云港、大连、湛江和防城港4个地理种群文蛤的遗传结构进行了研究，共捡测到329个位点，多态位点比率分别为76．7％、74．5％、73．5％和75．2％；种群内遗传相似系数分别为O．6193、0．6331、0．6577和O．6411，遗传多样性指数分别为O．2428、O．2347、0．2216和O．2232，以连云港文蛤多态位点比率和遗传多样性指数最高，种群

6、内遗传相似系数最低，表明连云港文蛤具有更丰富的遗传多样性水平，但4个种群问差异不大。连云港、大连和湛江文蛤种群间遗传相似系数与各自种群内的遗传相似系数没有显著差异，说明3种群遗传分化不明显，推测造成这一现象的原因是：大连和湛江近期发生过从连云港或江苏引种事件，从而引起3种群的基因交流，但还需要进一步的证据。聚类分析表明，防城港种群与其他3种群首先分开，表现出一定的遗传分化．总的来说，我国不同地区的文蛤遗传多样性水平较高，遗传改良潜力仍然很大。3．帘蛤科贝类rD卧内转录间隔区及5．8srR队基因序列研究应用聚合酶链式反应(PCR)扩增了文蛤

7、、青蛤、硬壳蛤、江户布目蛤(ProtothacajedoensisL．，1874)、薄片镜蛤(DosiniacorrugataR．，1850)和菲律宾蛤仔6种帘蛤的第一内转录间隔区(ITSl)和第二内转录间隔区(ITS2)序列，并进行了测序．结果表明，6种帘蛤ITSl序列长度522．900bp，是迄今已报道双壳贝类中变化范围最大的，GC含量57．66％．65．62％；ITS2序列长度281-412bp，GC含量65．21％-67．87％．6种帘蛤ITSl和ITS2序列种问差异很大，有明显的长度多态性，ITS2种间序列相似度高于ITSl。通

8、过对ITSl和ITS2序列的组装获得了6种帘蛤5．8SrRNA基因完整序列，序列全长均为157bp。以ITS2序列(包含5．8s和28SrRNA基因部分序列)为标记，用北极蛤科的Arctica