四川地区副猪嗜血杆菌病血清学调查及hps野外分离株的eric-pcr指纹图谱分析

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1、万方数据SiChUanAgriCU1tUra1UniVersitYDISSERTATIONSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementforMASTERDEGREESerologicalsurveyofHaemophilusparasuisinSichuanandERIC--PCRfingerprintinganalysisofthefieldisolatesBv，LuyeLaiDirectedbyProf．Xintian阢nProf．SanjieCaoProf．XiaoboHuangYa’arlSichuanMaV2014㈣旧～Ⅲ

2、4～脚7～㈣O，一舢2．～肿1～㈣蝈ⅢⅢⅢⅢ一，～万方数据本研究受下列基金项目资助特此表示感谢公益性行业(农业)科研专项项目副猪嗜血杆菌病和猪传染性胸膜肺炎防治技术研究与示范(项目编号：No．201303034)万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：寿疋西荣≯

3、

4、4年看Bt2Et关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。碎论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授权。(请在以上口内划“√”)纠中年占月，二日≯。，炸占月【2，El万方数据四Jil农业大学硕士毕业论文中文摘要猪群出现体质变弱、免疫力下降等特定条件，某些具有毒力的副猪嗜临杆菌可以从机体的多个部位侵入机体引发全身性的疾病，特

5、征病理变化常常表现为纤维素性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等。副猪嗜血杆菌病临诊上以体温升高、呼吸困难、关节肿大和运动障碍为特征，少数猪表现神经症状，近年来，本病己成为危害全球养猪业的主要细菌性疾病之一，且该病的发生呈逐年增长的趋势。因此本研究进行了四川地区副猪嗜血杆菌病血清学调查以及脚S野毒株的ERIC．PCR指纹图谱的分析，以期为副猪嗜血杆菌病的流行动态与疾病分布研究提供基础数据。1、四川地区副猪嗜血杆菌病血清学调查本研究从四川16个地区共采集了658份血清，利用己构建的间接ELISA方法对副猪嗜血杆菌的流行情况进行血清学调查。血清学调查结果显示，658份血清中330份为卯S抗体阳

6、性，总检出阳性率50．2％(330／658)；对于不同生长阶段的猪群进行分析的结果为，哺乳猪阳性率36．4％(82／225)，保育猪阳性率为74．8％(225／302)，育肥猪阳性率为17．6％(23／131)。从血清采集时间段不同来分析的结果为，秋季阳性率为82．6％(190／231)；冬季阳性率为43．2％(82／190)；春季阳性率为24．2％(30／124)；夏季阳性率为24．8％(28／1l3)。血清检测的结果表明：四川很多地区的副猪嗜血杆菌病并没有得到很好控制，这些地方包括乐山、德阳、绵阳、雅安、双流、资阳、达州、眉山等地区，从这些地方采集的血清的H啊血清抗体阳性检

7、出率都比较高，分别是64．1％，46．6％，64．6％，57．6％，64．4％，78％，100％，65％；其中保育猪的HPS血清抗体阳性检出率明显高于其他生长阶段猪群，并且秋冬两季的阳性检测率要明显高于春夏两季。2、副猪嗜血杆菌分离鉴定及分离株的ERIC．PCR指纹图谱分析本次研究在四川各地区采集血清的同时采集了很多疑似发生副猪嗜血杆菌病的患猪的肺、纤维性渗出物、关节液、胸腔积液等病料。我们从这些病料中分离出3株疑似副猪嗜血杆菌的革兰氏阴性杆菌，对此本实验还进行了～系列的鉴定工作。通过观察革兰氏染色后的镜检形态、卫星现象验证试验、生化性质检验以及PCR扩增片段大小检验等一套常规

8、鉴定步骤，最终结果显示这3株菌株确实是副猪嗜血杆菌。此外，万方数据四川农业大学硕士毕业论文我们还根据肠杆菌基因问保守重复序列(ERIC)，设计了一对特异性的引物，然后通过ERIC．PCR技术对我们分离到的3株副猪嗜血杆菌进行指纹图谱分析，结果显示，3株野外分离株的ERIC．PCR指纹图谱基本相同，应为同一基因型，并与15种标准血清型的基因图谱进行比对，发现与血清5型的图谱相似，初步推测这3株分离株为fj】l清5型株。此次研究不仅分离鉴定出3株副猪嗜血杆菌野毒株，还对副猪嗜血杆菌ERIC—PC