伯乐树的谱系地理学研究

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1、PhylogeographyofBretschneiderasinensiHemslByHUShangliAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofSciencelnBiochemistryandMolecularBiologyinCentralSouthUniversityofForestryandTechnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinDistrictChangshaHunan4

2、10004，P．R．CHINASupervisorProfessorXUGangbiaoMay,2014中南林业科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是零人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注弓

3、用的内容外，本论文不包含任何其德个人或集体已经发表或撰写的成果作品，也不包含为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式表明。本人完全意识到本声明豹法律后果由本人承担。作者签名：／b斗屿芦沙l≮年孓月、和学位论文版权

4、使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：1、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密口。／一l作者签名：—咖导师签名：力≮广舀矿．’f)ol睁r月1否日)oi≮年F月逸嚣摘要伯乐树(BretschneiderasinensiHemsl．)，又名钟萼木，被列为国家一级保护

5、植物，在研究被子植物的系统发育和古地理、古气候等方面具有重要的科学价值。本学位论文采用叶绿体DNA非编码序列标记对伯乐树l9个天然种群共232个体进行种群遗传结构及分子谱系地理研究，主要结论如下：(1)建立并优化了伯乐树叶绿体DNA非编码序列的PCR反应及扩增体系伯乐树叶绿体DNA非编码序列PCR反应体系为：30“L反应体系，30ng模板DNA，lO×pfuPCRbuffter，2．9mMM92+，120mMdNTP，上下游引物各11laM以及3U的Taq酶，不足部分加双蒸水补齐。PCR扩增反应程序为：94℃预变性4min，9

6、5℃变性50s，退火50s，72℃5rain，35个循环；72℃延伸10min。退火温度依引物不同而异。(2)筛选出适宜于伯乐树谱系地理分析的cpDNA引物利用已优化的叶绿体DNA．PCR扩增体系，筛选出了3条稳定的、重复性高的引物：PipetBl41IF．PipetD738R、psbA．棚HGUG和trnL．tmF。退火温度分别为52℃、59℃、56℃。(3)分析了伯乐树种群遗传结构3条叶绿体DNA序列共鉴定出10个单倍型(Hapl．Hapl0)，其中，单倍型Hapl分布最为广泛，为所有参试种群共有。大瑶山、猫儿山、南昆山、

7、铜钹山这4个种群中，只有单倍型Hapl，其余9种单倍型具有种群特异性。采用PAUP4．0软件中最大简约法，构建了伯乐树叶绿体DNA单倍型的系统发育树。单倍型Hapl、Hap5、Hap6、Hap9、Hapl0聚为第一支，单倍型Hap3、Hap2、Hap8聚为第二支，单倍型Hap4、Hap7聚为第三支。DNASP5．0软件分析显示，伯乐树种群核苷酸多样性Ot)为0．00177，平均基因流(Ⅳm)为0．1176。群体间遗传分化(G。t)为0．230，Mt为0．314；分子方差分析(AMOVA)结果表明，伯乐树群体间遗传变异为t9．0

8、4％，群体内遗传变异为80．96％，种群遗传分化系数民为0．19046。这表明，伯乐树种群间遗传分化水平较高，具有明显的谱系地理结构。中性检验显示，伯乐树种群可能经历过种群扩张。关键词：伯乐树，叶绿体DNA，单倍型，遗传多样性，谱系地理学AbstractBretschneidernsinensihasbeenlistedastheNationalFirst—GradeprotectedplantsinChina．Itistheimportantscientificresearchmaterialforphylogeny,pal

9、eogeographyandpaleoclimate．ThephylogeographyandgeneticdiversityofB．sinensihavebeenresearchedusingnon-codingsequenceofchloroplastDNAmarkers