乌贼墨多糖sip-1干预环磷酰胺介导小鼠卵巢细胞凋亡与自噬的研究

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1、学位论文答辩委员会组成主席：委员：霄盹渡一力觚争献坜导师：捌犷妒么∥汐时阍．洲}．易．口Ic，弋广东海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：f匐p丁穆20侈年莎月，日学位论文版权使甩授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查

2、阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密口。(请在以上相应方框内打“√”)作者签名：导师签名：20t{；年b具f日20f夕年易月』日乌贼墨多糖SIP一1干预环磷酰胺介导小鼠卵巢细胞凋亡与自噬的研究摘要乌贼墨多糖(Squidinkpolysaccharide,SIP)是从废弃物乌贼墨囊中分离提取得到的具有诸多生物学功能的海洋生物活性物质。前期研究发现SIP对环磷酰胺(CP)致小鼠肾、肺、肝、睾丸、卵巢损伤具有保护作用。本

3、文旨在探讨乌贼墨多糖分离纯化后的组分SIP．1的结构及其干预环磷酰胺介导卵巢细胞凋亡与自噬的机制。本研究经酶法提取、乙醇沉淀方法分离提取得到粗多糖，然后经过DEAE．52纤维素柱层析和SephacrylS-300HR凝胶渗透色谱进行分级纯化，得到三个糖组成相对单一组分SIP-1、SIP．2、SIP．3，以SIP．1为研究对象，对其纯度进行测定。分离纯化得到SIP．1经紫外扫描显示260am及280nm处无吸收峰，说明SIP．1不含有核酸、蛋白质等杂质。通过高效液相色谱分析，结果显示只有一个峰形较对称且峰宽较窄的峰，说明组分SIP．1较纯。对SIP．1进行初级结构分析。红外光谱对

4、其结构进行表征，结果分析显示SIP．1在波数3385．96cm‘1处有很强O．H伸缩振动和N．H伸缩振动，在波数2931．23cm"1处有C．H伸缩振动，1637．74cm以处是氨基N-H变角振动，1077cm‘1和1034．2Icm。1是多糖羧基中C．O伸缩振动峰。将SIP．1进行完全酸水解，利用高效液相色谱法进行单糖组成分析，结果表明SIP．1含有氨基半乳糖(GalN)、阿拉伯糖(Ara)，其摩尔比为1：1。高碘酸氧化、Smith降解分析结果显示SIP．1中可能存在1—2、1_3、1—6类型的糖苷键。核磁共振1HNMR和13CNMR分析结果表明，SIP．1中单糖糖苷键和构型

5、可能为0【．L．Arap存在l_5糖苷键，0【．D．GalNp存在l_6糖苷键。40只健康的昆明种雌性小白鼠，将其随机分为4组：空白组、模型组、样品对照组、治疗组。15d后，测定小鼠体重、生殖器官重量及指数、卵巢组织病理学变化及血清激素水平。实验结果表明CP对雌性小鼠卵巢具有毒性损伤作用，而SIP．1能缓解CP所致的卵巢生殖损伤作用。与空白组相比，模型组卵巢重量、卵巢指数、子宫重量及子宫指数极显著(尸<0．01)降低，小鼠体重显著(尸

6、水平(E2)降低。与模型组相比，SIP．1治疗组对CP所致的各项指标变化均有明显的改善作用(P

7、P—Akt表达水平显著降低(氏0．05或P<0．01)。与模型组相比，SIP．1显著改善CP所致卵巢的损伤，卵巢细胞的凋亡率显著降低(尸<0．05)，且SIP．1显著缓解CP所致Bcl．2、P．AKT表达水平的降低(尸<0．05或P<0．01)及p38磷酸化水平、LC3、Beclinl表达水平的升高(尸<0．05)。说明SIP．1可能通过调控与凋亡及自噬相关的蛋白的表达水平来缓解CP所致的卵巢颗粒细胞的凋亡与自噬。SIP．1是一种具有新颖结构的纯化的乌贼墨多糖，能有效缓解CP所致的雌性生殖系