低剂量双酚a跨代传递对大鼠卵巢和子宫发育的影响及分子机制探讨

低剂量双酚a跨代传递对大鼠卵巢和子宫发育的影响及分子机制探讨

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时间:2019-03-02

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1、复旦大学硕士学位论文低剂量双酚A跨代传递对大鼠卵巢和子宫发育的影响及分子机制探讨LowdosesofBisphenolAcross-generationaltransfereffectonthedevelopmentofovaryanduterusofratsanditsmolecularmechanism硕士研究生:周姻颖导师.?朱焰副研究员导师组成员:谢淑武副研究员复旦大学硕士学位论文低剂量双酚A跨代传递对大鼠卵巢和子宫发育的影响及分子机制探讨目录巾娜要1Abstract5ItfW9第一章:妊娠期母鼠接触双酚A对F1代大鼠卵巢和子宫发育的影响1.实验目的172.实验材料

2、与方法173.实验结果204.H30第二章:晡乳期母鼠接触双酚A对F1代大鼠卵巢和子宫发育的影晌1.实验目的332.实验材料与方法333.实验结果344.讨论42第三章:双酚A作用敏感阶段、器官敏感性和作用持续时间的评价1.目6^442.443.结^44复旦大学硕士学位论文低剂量双酚A跨代传递对大鼠卵巢和子宫发育的影响及分子机制探讨4.a48第四章:双粉A对H代大鼠卵巢和子宫基因表达的影响1.实验目的502.实验材料与方法493.实验结果554.it论59第五章:双勘A对F1代大鼠卵巢VEGF和PTN蛋白表达的影响1.622.

3、实验材料与方法623.实验结果654.ife6670综述:双裔A影响雌性动物生殖系统及子代发育的研究进展72在读期fil发表论文83Wi84复旦大学硕士学位论文低剂量双酚A跨代传递对大鼠卵巢和子宫发育的影响及分子机制探讨中文摘要目的:研究在发育的不同阶段(妊娠期和哺乳期),母鼠接触双酚A(BPA)通过跨代传递对子代(F1代)SD大鼠卵巢和子宫生长发育的影响,评价BPA作用的敏感阶段、器官敏感性及作用持续时间;研究BPA跨代传递对F1代大鼠卵巢和子宫基因表达以及血管生成相关蛋白表达的影响,初步揭示BPA作用的分子机制。施1.按照各国BPA的溶出限量规定(中美限量规定:0

4、.05mg/kg,欧盟限量规定:0.5mg/kg,日本限量规定:2.5mg/kg),分别于母鼠妊娠期(D7-20)和哺乳期(PND1-21)灌胃给予BPA0.05、0.5、2.5mg/kg/d,同时设置溶剂对照组和己烯雌酚(0.05mg/kg/d)阳性对照组。记录F1代大鼠出生后30天的体重、阴道开口日龄和动情周期;分别于仔鼠出生后第30天(相当于人青春期前)和第60天(相当于人成年)抽取半数雌性子代解剖,称量卵巢和子宫重量,计算卵巢和子宫脏器系数;卵巢和子宫组织切片,HE染色,光学显微镜观察病理组织学变化;酶联免疫吸附测定法(Elisa)测定血清雌二醇(E2)和孕酮(P4)的水平。2.

5、以阴道幵口时间、卵巢和子宫脏器系数、卵巢和子宫病理组织学、血清激素为指标,评价BPA对F1代大鼠卵巢和子宫影响的敏感阶段、器官敏感性和作用持续时间。3.在基因水平,利用高通量基因芯片技术检测溶剂对照组和BPA2.5mg/kg组F1代大鼠卵巢和子宫炎症反应和自身免疫mRNA基因表达,比较BPA2.5mg/kg组和溶剂对照组F1代大鼠卵巢和子宫的差异表达基因,筛选BPA明显影响卵巢和子宫的基因和信号传导通路,分析BPA影响F1代大鼠卵巢和子宫基因表达的特点。1复旦大学硕士学位论文低剂量双酚A跨代传递对大鼠卵巢和子宫发育的影响及分子机制探讨4.在蛋白水平,利用Westernblotting技

6、术检测BPA2.5mg/kg组F1代大鼠卵巢血管生成相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF)和多效生长因子(PTN)的蛋白表达水平,初步探讨BPA诱导F1代大鼠多囊卵巢病变的分子机制。结果:1.妊娠期母鼠接触BPA对F1代大鼠卵巢和子宫发育的影响与溶剂对照组相比,灌胃给予妊娠母鼠BPA0.05、0.5、2.5mg/kg可剂量依赖性地导致F1代大鼠阴道开口时间明显提前(P<0.05);仔鼠青春期前(PND30),BPA2.5mg/kg可导致卵巢和子宫脏器明显系数增加(P<0.05),卵巢囊状卵泡比例明显增加、呈明显地多囊样病变(P<0.05),血清E2、P4含量明显升高(P<0.05);仔鼠成

7、年后(PND60),BPA2.5mg/kg组卵巢囊状卵泡比例明显增加(P<0.05),但卵巢和子宫脏器系数、血清E2、P4含量与溶剂对照组相比没有明显变化。BPA各剂量对仔鼠子宫病理组织学没有明显影响。2.晡乳期母鼠接触BPA对F1代大鼠卵巢和子宫发育的影响与溶剂对照组相比,灌胃给予哺乳期母鼠2.5mg/kgBPA可导致F1代大鼠阴道开口时间明显提前(P<0.05),青春期前仔鼠子宫脏器系数明显升高(P<0.05);除此之外,BPA

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