黑面神主成分及抗慢性皮炎--湿疹药效学研究

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名丝趁日期：7例驴年g月7砌日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索

2、，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名丛论文导师同期：1／o，爷年S月7移同摘要目的：本论文通过黑面神茎、嫩枝叶中总黄酮类成分含量比较同时结合黑面神茎、嫩枝叶水提液和醇提液的体外抑菌作用对比研究，确定黑面神治疗皮炎湿疹皮肤病的有效药用部位及提取方式。在此基础上，对黑面神嫩枝叶水提物中表儿茶素含量测定方法进行考察及水提工艺的优化研究，为黑面神的质量控制提供依据。并进一步对嫩枝叶水提液抑菌有效部位进行筛选，通过对小鼠慢性皮炎一湿疹疗效观察，证实黑面神嫩枝叶水提物的治疗作用，并筛选其有效部位，为进一步研究黑面神抗慢性皮炎一湿疹药效作用

3、机制及其新制剂的开发提供实验基础。方法：(1)采用紫外分光光度法(UV)对黑面神茎、嫩枝叶中总黄酮含量进行比较。以芦丁为对照品，A1(NO。)。-NaNO．,一NaOH系统显色法，测定波长为511nm。(2)采用高效液相色谱法(HPLC)对黑面神嫩枝叶水提物中表儿茶素含量进行测定。设计正交试验考察浸泡时间、溶媒倍量、提取时间和提取次数对表儿茶素含量的影响，优选水提工艺条件。(3)采用纸片扩散法对比黑面神茎、嫩枝叶水提液和醇提液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌及白色念珠菌的体外抑菌作用，并采用试管二倍稀释法测定嫩枝叶提取液对敏感菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(IdBC)。

4、运用系统溶剂萃取法将黑面神嫩枝叶水提液分为氯仿、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇及剩余水层部位，采用试管二倍稀释法分别进行四个不同极性部位对金黄色葡萄球菌、耐药金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌的体外抑菌实验研究，用以筛选抑菌作用的有效部位，并测定对敏感菌的MIC和MBC。(4)通过对小鼠慢性皮炎一湿疹疗效的观察，确证黑面神嫩枝叶水提物的治疗作用并筛选其有效部位。采用2，4---硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠慢性皮炎一湿疹模型，将小鼠分为基质对照组，模型组，皮炎平组，各试药组，每组各10只。每日外用相应药物2次，连续使用12天。使用游标卡尺测量并计算左右耳厚度差；电子分析天平称重并计算耳肿胀度及肿胀抑制率

5、；解剖胸腺、脾脏称重并计算相应指数；光学显微镜下观察小鼠耳组织病理学变化。结果：(1)茎、嫩枝叶中总黄酮含量分别为38．58mg·g。1和79．16mg·g～。(2)表儿茶素在0．0066～0．2640mg·mlq范围内线性关系良好。水提最佳工艺条件：嫩枝叶加20倍量水浸泡45分钟，80。C提取2次，每次1小时。所得表儿茶素含量为0．7031mg·g一。(3)嫩枝叶水提液对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为15．625mg／ml和125mg／m1，抑菌率达257．0％；对铜绿假单胞菌的MIC和MBC均为125mg／m1，抑菌率达115．5％；对白色念珠菌无抑菌作用；而茎水提液对试验菌均无

6、抑菌作用。嫩枝叶水提液乙酸乙酯部位对金黄色葡萄球菌、耐药金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌三种试验菌的抑菌作用最强，其MIC均为62．5mg／ml，MBC均为250mg／ml；其次为水饱和的正丁醇部位，其对三种试验菌种的MIC分别为125mg／ml、125mg／ml和62．5mg／ml，MBC分别为500mg／ml、500mg／ml、250mg／ml；剩余水层部位对金葡菌和耐药金葡菌的MIC均为62．5mg／m1；对铜绿假单胞菌无抑菌作用；氯仿部位对试验菌种均无抑菌作用。(4)黑面神嫩枝叶水提物409生药／(kg·d)’1能有效减轻慢性皮炎一湿疹小鼠耳组织增厚、肿胀，显著抑制免疫器官指数，改善其

7、病理学改变，且显示剂量依赖性。黑面神嫩枝叶水提物乙酸乙酯高剂量组及正丁醇组可明显改善慢性皮炎一湿疹模型的鼠耳增厚，可显著抑制小鼠耳肿胀，抑制慢性皮炎一湿疹小鼠皮损中炎症细胞浸润，改善耳片病理改变，正丁醇组显著抑制小鼠免疫器官指数。而三氯甲烷部位和剩余水层部位对慢性皮炎一湿疹模型小鼠均无明显作用。结论：以上结果显示，黑面神治疗皮炎一湿疹皮肤病的有效药用部位为其嫩枝叶。黑面神嫩枝叶水提物抑菌有效部位及治疗小鼠慢性皮炎一湿疹有