用于大白菜品种核酸指纹库构建的ssr核心引物筛选

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时间:2019-02-28

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1、杨金雪用于大白菜品种核酸指纹库构建的ssR核心引物筛选摘要本研究利用ssR标记技术初步筛选出29对多态性引物,作为一套适合于大白菜品种核酸指纹库构建的核心引物,为构建大白菜品种标准DNA指纹库奠定了初步基础。本研究的结果如下:1.将来源于国际上已发表文献中的2050对SSR引物与本实验室开发的79对SSR引物,总共2129对引物与大白菜参考A基因组进行blaSt比对,确定引物所属连锁群及物理位置,结果得到已于大白菜基因组定位的覆盖全基因组10个连锁群的SSR引物共544对。从263份大白菜自交系中选取12份骨干自交系作为sSR引物多态性筛选材料,从544对SSR引物中筛选出

2、稳定性好,多态性丰富,重复性好的引物共5l对,平均每个连锁群含有引物在5对以上。2.利用5l对多态性引物对263份自交系进行SSR扩增,结果均得到扩增清晰稳定且单一的谱带,在供试材料中共检测出227个等位基因位点,每对引物检测到等位基因2.10个,平均为4个。每个位点的多态性信息量(PIC值)变化范围在O.2080.0.8154之间,平均为0.5159,其中PIC值最大的引物为N14803,PIC值最小的引物为CX272719,共有28对引物的PIc值大于0.5。3.使用tassel4.0软件对51对引物进行主成分分析(PCA),结果表明:当主成分个数为27个时,51对引物

3、的累积贡献率可达到85.5%,从中挑选24对最具有代表性的SSR引物,结合引物的扩增效果、多态性、稳定性及重复性、等位基因数量、引物的物理位置、PIC值和主成分分析结果等指标,初步确定了一套含29对SSR引物的核心引物。4.利用29对核心引物和51对多态性引物的基因分型结果分别对51份具有代表性的大白菜自交系进行聚类,比较分析两个聚类图,发现分类结果基本一致,并且均可按照成熟期和抱球方式进行划分。这表明29对引物可以视为核心引物,以待进行后续研究。5.利用29对核心引物和5l对多态性引物的基因分型结果分别再对263份大白菜自交系进行聚类比较,发现两种聚类图均大致被划为两类,

4、第一类是以春夏大白菜为主;第二类是以秋大白菜为主,并且按照抱球方式分成三个亚类:第一亚类为叠抱类型,第二亚类为拧抱类型,第三亚类为合抱类型。这表明两种聚类结果相似度很高。因此,通过两种聚类结果的比较分析,进一步证实了所选29对核心引物的代表性,也为下一步构建大白菜品种DNA指纹库提供了依据。关键词:大白菜,ssR,核心引物,指纹图谱II扬州大学硕士学位论文Abstract111t11isstudy,、veusedSSRmarkertechl0109yscreeIling29markersasasetcorepriIners.ItwaSreferencedfor“Resear

5、chonEstablishingDNAFinge印rintingDatabaseofCmnesecabbagecultiVars”arldthepuritya11drealityidentificationofCllinesecabbagecultiVars.Theresultsweresummarizedasf.oUows:BasedonintemationalreferencesandBr口,,fc口Database.wefound2129SSRmarkersandmenscreened544m印pedSSRm缸kerSmatdistributedontheten1iI

6、出age铲oupsofChinesecabbage.Weused12C11inesecabbageinbredlinematerials仔om263Chinesecabbageinbredlinestoscreen51markersthatcan锄pli匆stablyinPCRreactionaJldbeeasilyscoredandrelatiVelyeVenly.263Chjnesecabbagesinbredlineswereselectedto咖dythegeneticdiVersit),usingSSRtectllliquesby觚enty一血necoreprim

7、erpairs.227allelesweredetected锄ongtheCllinesecabbageinbredlines.Tllen哪berofallelesperlocuS础ged丘om2to10aIldthemeanwaS4.TheValuesofp01yIno叩11ismi幽mationcontent(PIC)foreachSSR10cusV撕ed舶m0.2080—0.8l54witllanaVerageof0.5159,inwllichp打merN14803waSthe11i曲estw11ileⅡ1e

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