马铃薯黑痣病菌系统发育分析及融合群快速鉴定

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1、万方数据分类号：S垒墨墨：墨圣密级：韭蜜单位代码：!QQ璺鱼学号：2Q!!墨垒量马铃薯黑痣病菌系统发育分析及融合群快速鉴定PhylogeneticanalysisofR办妇c幻刀缸sD协Zfrompotatoandtherapididentificationoftheiranastomosisgroups学位申请人：张春艳指导教师：朱杰华教授杨志辉教授学科专业：植物病理学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一四年五月二十八日万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果

2、。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇堡壅些本堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我～同工作的同志对本研究所做的f卜何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：弛满漾l签字日期：西俘年s月7譬日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇垦盔些盘堂有关保留、使刚学位沦义的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农业大堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可

3、以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：％恚艳导师签名：签字日期：劢f丫年s月2苦日签字日期：纠午年丐月1占日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：万方数据摘要马铃薯黑痣病是由立枯丝核菌(R办fZocfo胛胁sDZ口"i)引起的一种重要马铃薯土传病害。近年来，该病在我国北方马铃薯主产区已成为重要病害，严重影响着马铃薯块茎的品质、商品价值及产量。本研究主要对黑痣病菌营养亲和群及致病力进行测定，rDNA—ITS、TEF一10【两对基因联合系统发育分析

4、，利用Cytb基因片段长度差异快速鉴定不同融合群。主要研究结果如下：1．内蒙古和河北两省马铃薯黑痣病菌104株，通过对峙培养，进行营养亲和群的划分，共可划分为50个营养亲和群。其中，AG3所有菌株共划分为17个不同营养亲和群，其中AG3．N占测试菌株比例最高，为11．32％；其次是AG3．F和AG3．A，出现频率分别为4．81％和3．85％；AG2．1融合群内AG2—1一B和AG2．1一A『I，J⋯现；砸=}7较高，分别为4．8l％和3．85％；其它营养亲和群的出现频率均较低(0．96～2．89％)。2．对马铃薯黑痣病菌7个融合群

5、的代表菌株进行土壤接菌法致病力测定结果表明，除AG．A无致病能力外，其它融合群均致病；而且，不同融合群菌株之间以及不同营养亲和群菌株之间的致病力同样存在差异。其中，AG3致病力最强，AG4和AG5次之，AG2．1、AG9和AGl．IB最弱。症状上也存在一定差异，与其它融合群对马铃薯的致病力相比，AG3菌株引起的病斑颜色较深，损伤面积较大。3．对马铃薯黑痣病菌7个不同融合群菌株进行ITS序列比对分析，结果表明，5．8srDNA序列在所有融合群中高度保守，ITS区具有高度的多态性，并且ITSl区段比ITS2区段的变异位点多。不同融合群

6、问ITS相似度范围是84．2～96。3％，而同一融合群内ITS序列相似度为92．1％～99．9％。AG4融合群内共存在三个融合群弧群．AG4HGI与AG4HGII的ITS序列关系较近，而与AG4HGIilIjI，J父系州吖1较远。√t明ITS序列可以用于融合群及亚群系统发育关系进行分析。4．下载担子菌门延伸因子基因序列，比对分析并根据保守区设计立枯丝核菌延伸因子基因引物对TEF10【IRSF：CGTGAYT，rⅥ玎CAAGAACATG／TEF1o【．RSR：GACTTGACTTCAGTGGTCAC，扩增产物片段长度约为680bp左

7、右。基于TEF．10【序列信息对不同融合群代表菌株进行遗传关系分析，不同融合群菌株间延伸因子序列相似性范围是85．2～93．9％，融合群内序列相似度为92．4～99．9％。构建的系统发育树与ITS系统发育树拓扑结构基本一致，支持率略有不同。不同融合群及亚群的延伸因子氨基酸序列比对分析发现，融合群内部没有差异而融合群问共存在13个氨基酸的变异位点。结果表明，保守的功能基因TEF。la能够有效对立枯丝核菌进行融合群及亚群的划分。5．根据AG3和AGl．IB细胞色素b基因序列设计引物CytbRS．F／C”bRS．R，不同融合群的扩增产物

8、长度在550bp到looObp之间。可以对马铃薯黑痣病菌常见融合群AGl．IB、AG2．1、AG3、AG4-HGII、AG5菌株进行有效扩增，不同融合群间Cytb扩增产物长度差异明显，由此可通过琼脂糖凝胶电泳快速鉴定不同融合群。关键词：立枯丝核菌；