蛹虫草生物钟节律基因(cmfrq)的序列分析和表达调控

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1、万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解江西师范大学研究生院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权江

2、西师范大学研究生院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：签字日期：年月日导师签名：签字日期：年月日万方数据摘要蓝光和温度是环境中的重要信号因子，能引起某些真菌的生物节律的变化，而蛹虫草(Cordycepsmilitaris)中产生和控制生物节律运转的是生物振荡器，其中心成分是frequency(CmFRQ)基因。本论文主要对生物振荡器的中心成分C'腰RQ基因进行了克隆、序列分析并研究蓝光和温度对生物钟基

3、因(CmFRQ)表达的影响。在GenBank中以已知的脉胞菌(Neurosporacrassa)昼夜节律基因(NcFRQ)mRNA序列进行Blast分析，在蛹虫草全基因组序列中的CordycepsmilitarisCM01eontiq50序列中发现一段同源序列。通过ORFfinder软件分析找到一段可能的蛹虫草CmFRQ-ORF序列。以此为依据设计引物，而后进行PCR、测序和比对，初步证明CmFRQ-ORE就是CmFRQ基因的开放阅读框(ORF)，全长为2727bp。再根据CmFRQ-ORF序列和3’RACE法设计引物，获得了

4、C榭嘤Q基因的mRNA3’端部分656bp序列，和GenBank中的CordycepsmilitarisCM01conti950进行比对，同源性较高。CmFRQ基因可编码903aa，对其进行序列分析表明，其中存在着1个coiled-coil结构域和1个LAM(LAmotifRNA-bindingdomain)功能域。将CmFRQ-ORF部分序列连接载体pEASY-E1ExpressionVector，转化受体BL21(DE3)细胞，菌落PCR鉴定和测序分析表明，CmFRQ基因ORF部分序列原核表达系统基本构建成功。使用实时荧光

5、定量PCR方法研究蓝光和温度对CmFRQ基因相对表达量的影响。结果表明CmFRQ基因的表达在不同蓝光时长对该基因影响不同，相对表达量呈现波浪式变化。在不同温度条件下，基因相对表达量有一定的变化，尤其是在18℃时CmFRQ的相对表达量最高。关键词：蛹虫草；CmFRQ基因；原核表达；实时荧光定量PCR；基因表达调控万方数据AbstractBluelightandtemperatureareimportantenvironmentalfactors，whichcancontributetochangesoffrequencygene

6、insomefungi．InCordycepsmilitaris，thecorecomponentofbiologicaloscillatorisfrequency(CmFRQ)genethatplaysaroletogenerateandcontrolbiologicalrhythem．Thepaperisfocusedoncloning，sequenceanalysisoffrequencygeneofcorecomponentoftheclockgeneinCordycepsmilitar&，anditwasstudie

7、dtheeffectofbluelightandtemperatureontheexpressionotCmFRQgene．WeblastedthesequenceoffrequencygenemRNAofNeurosporacrassainGenBankandfoundahomologoussequenceinaWhole—genomeshotguncontigs，CordycepsmilitarisCM01contiq50．By11S吨theORFfmder,theORFofCordycepsmlTitarisfreque

8、ncygenewasfound．AccordingtotheORFsequencewhichwegot,theprimersweredesignedtoobtaintheCmFRQ-ORFsequencebyPCR,sequencingandalignment．Itissug