蛋白激酶a和钙蛋白酶参与调控血小板sema4d切割的机制研究

《蛋白激酶a和钙蛋白酶参与调控血小板sema4d切割的机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：查墨窆!El期：必l够．9苏州大学学位论文使用授权声明～IF㈣本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、

2、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属．在——年一月解密后适用本规定。非涉密论文团论文作者签名：杰毡日期：导师签名：缢尘El期：少t心·VO,,lO-．乒蛋白激酶A和钙蛋白酶参与调控血小板Sema4D切割的机制研究中文摘要神经导向因子Semaphorin4D(Scma4D；CDl00)已经证明在血小板上表达，并且通过接触

3、依赖性方式加强胶原诱导的糖蛋白VI(GPVI)／FcRY复合体信号通路中脾酪氨酸激酶(Syk)的活化来促进血栓形成。我们之前的研究已经证明血小板Sema4D胞外段可以被金属蛋白酶ADAMl7切割，产生一个120kDa的具有生物学活性的大片段。并且，我们也鉴定到Sema4D胞内段部分序列与钙调蛋白结合，调节血小板Sema4D的胞外切割。但我们的进一步研究发现，还有其他的调控机制存在。首先，我们探索了蛋白激酶A(PKA)是否参与Sema4D胞外切割的调控。PKA是环腺苷酸(cAMP)依赖的蛋白激酶，PKA在血小板内起着负反馈作用，PKA的活化能够抑制刺激剂诱导的血小板活化，

4、维持血小板在静息状态从而自由循环。抑制PKA的活性能够诱导金属蛋白酶介导的血小板GPIbQ的切割。为了研究PKA是否也参与Sema4D胞外段切割，我们使用PKA抑制剂H89和PKA活化剂forskolin来进行一系列实验，结果表明抑制PKA能够诱导金属蛋白酶介导的Scma4D胞外切割，活化PKA能够抑制刺激剂诱导的Sema4D胞外切割。进一步研究发现抑制PKA导致的Sema4D胞外段切割是通过提高ADAMl7酶活性引起的，而不是通过使钙调蛋白从Sema4D解离造成的。同时，我们注意到Sema4D也发生胞内段的切割，主要表现为在某些情况下，血小板Sema4D发生胞外切割后

5、残余的28kDa胞内小片段会消失。但是，Sema4D的胞内水解切割的详细机制还不清楚。之前的研究已经证明钙调蛋白能够和Serna4D胞内段结合，并且与钙调蛋白结合的分子往往都是钙蛋白酶(calpain)的底物。这给我们带来新的启示：Scrna4D胞内结构域可能被胞内钙离子依赖的半胱氨酸蛋白酶calpain切割。因此，我们对calpain调节Sema4D切割的作用进行了研究。结果表明：1)血小板Scma4D胞内切割主要是由非生理性刺激剂包括w7、A23187和dibucaine所介导。2)w7、A23187和dibucaine能够显著地提高calpain的活性，使cMpm

6、n能够水解切割Sema4D胞内段。3)calpain参与调节Scma4D胞中文摘要蛋白激酶A和钙蛋白酶参与调控血小板Sema4D切割的机制研究内段的切割并不依赖于ADAMl7。4)calpain介导的血小板Sema4D胞内切割与血小板活化和凋亡有关。因此，我们的结果揭示了调节Sema4D胞内外切割的新机制，为研究与Sema4D切割相关的胞内蛋白和信号通路以及相关疾病提供了新的思路。关键词：血小板；Sema4D；蛋白激酶A；钙蛋白酶；II作者：李强指导老师：朱力蛋白激酶A和钙蛋白酶参与调控血小板Sema4D切割的机制研究英文摘要Involvementofproteinki

7、naseAandcalpaininplateletSema4DsheddingAbstractAxonguidancemoleculeSema4D(Semaphoring4D)hasbeenprovedtobeexpressedonplatelets，andsupportsthrombusformationbyamplifyingSykactivation，anearlystepincollagensignalingviatheglycoproteinVI(GPVI)／FcR'l，complex，whereinacontact—depen