碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌基因型研究及同源性分析

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1、分类号UDC616硕士学位论文密级公五编{}!Q29璺Zt1140—0—5碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌基因型研究及同源性分析GENoTYPEANDHoMOLoGYANALYSISOFCARBAPENEMSNON．SUSCEPTIBLEENTERoBAcTERIAcEAE作者姓名：指导教师：申请学位：学科专业：论文提交日期：论文答辩日期：学位授予单位：学位授予日期：答辩委员会主席：评阅人：胡雪孙长贵教授硕士临床检验诊断学2014年年月砑日2014年6月6日江苏大学2014年6月日黄新祥独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导

2、下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：占日雪2010-年二月加日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的

3、内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密口。学位论文作者签名：胡雪功f(解6月fo日指导教师签名：20停年石月／v日江苏大学硕士学位论文摘要目的近年来由于大量使用碳青霉烯类抗菌药物，使该类药物对产ESBLs和头孢菌素酶的肠杆菌科细菌的抗菌活性下降，而肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性则明显增强。

4、本研究拟分析碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌的表型和基因型，探讨该类细菌的流行情况和耐药机制，为临床合理使用抗菌药物和减少院内感染提供依据。方法1．收集2010年1月至2013年10月，来自临床标本的碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌125株，纸片扩散法检测细菌的敏感性，改良Hodge试验(MI-IT)检测碳青霉烯酶的表型，纸片扩散表型确证试验检测超广谱p．内酰胺酶(ESBLs)。2．PCR扩增后的产物经DNA测序后，通过BLAST比对等方法确定收集的125株菌株中携带的碳青霉烯酶、质粒介导的AmpC酶和超广谱13一内酰胺酶的耐药基因型。3．脉冲场

5、凝胶电泳技术对收集到的125株菌株进行同源性分析。4．随机挑选30株已经检测出含blar,a,C_2耐药基因的菌株，用碱裂解法提取质粒，PCR扩增编码KPC．2的基因，构建表达载体pEASY—T1．KPC一2，并转化至感受态细胞，转化子经PCR后测序，以确认构建和转化是否成功，并对测序成功的转化菌株做药敏试验。勃}蟹皇目术1．药敏试验结果125株碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌对头孢噻肟和阿莫西林／克拉维酸耐药率最高，均为93．6％；对环丙碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌基因型研究及同源性分析沙星、复方新诺明、四环素、头孢他啶、头孢西丁、氨曲南、

6、亚胺培南和厄他培南的耐药率在64．O％～89．6％之间；对阿米卡星、妥布霉素、呋喃妥因和头孢吡肟耐药率相对较低，为14．4％～38．4％；对替甲环素和米诺环素敏感率高，分别为88．O％和84．O％，检出11株对替甲环素中介株和4株耐药株，其中对替甲环素耐药细菌分别为2株粘质沙雷菌和2株产气肠杆菌。2．改0_Hodge试验及ESBLs表型试验结果125株碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌中，共检出产碳青霉烯酶细菌(Hodge试验阳性)为89株，占71．2％，其中大肠埃希菌为主要检出菌有58株，占65．2％(58／89)，其次是阴沟肠杆菌15株，占16

7、．9％(15／89)，粘质沙雷菌7株，占7．9％(7／89)，产气肠杆菌6株，占6．7％(6／89)。产ESBLs的细菌为42株，占33．6％。同时产这两种酶的细菌为23株，占18．4％。3．耐药酶基因检测及序列测定结果125株碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌中，分别有42(33．6％)、5(4．O％)和1(0．8％)株细菌检出6肠KPc-2、blailvfP_26和blaw．2等碳青霉烯酶基因；分别有18(14．4％)、9(7．2％)和2(1．6％)株细菌检出blacTx-M_15、blasHv-12和blacTX-M-3等ESBLs基因；分别

8、有19(15．2％)和13(10．4％)株细菌检出blaAcT_1和blacMY．2等AmpC酶基因。其中71株大肠埃希菌中检出39(5