核基质蛋白satb1在慢性乙肝患者中的表达及功能研究

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1、万方数据论文题目：核基厦蛋自§丛垦羔在慢性圣压皇耋虫趁麦达区功篚硒究万方数据目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1Abstract⋯⋯．⋯．．⋯．⋯⋯．⋯⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯⋯．⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯．⋯．⋯：；前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6第一部分慢性乙肝患者Treg细胞和Tconv细胞中SATBl的表达差异及其临床意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．81材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．82结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15：；讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯214结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24第二部分靶向SATBl基因shRNA慢病毒载体和SATBl真核表达载体的细胞模型构建及功能研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯251材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯423讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯524结子占⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．56作者简历及攻读学位期间发表的论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．60致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62万方数据温州医科大学硕士学位论文核基质蛋白SATBl在慢性乙肝患者中的表达及功能研究摘要背景和目的乙型肝炎为世界流行性疾病，HBV感染所致的肝炎、肝硬化和肝细胞肝癌严重威胁人类生命健康。HBV是非细胞毒性病毒，其引发的宿主免疫应答，尤其是T细胞介导的免疫应答，对乙肝发病和临床转归起着关键作用。CD4

4、+CD25+调节性T细胞(regulatoryTcell，Treg)具有免疫抑制作用，可直接或间接抑制HBV特异性CTL的功能，而CD4+CD25．普通T细胞(Tconv)具有促进免疫炎症反应、分泌效应性细胞因子的作用。SATB1(specialAT-richsequencebindingprotein1)是一种主要表达于胸腺细胞和T细胞中的核基质区结合蛋白，通过改变染色体高级结构来调控T细胞分化过程中多种基因的表达。SATBl对Treg细胞有抑制作用，从而对HBV感染的转归产生影响。本研究探讨慢性乙肝患者CD4+CD25+Treg和CD4+CD25．Tconv细胞中SATBl的表

5、达水平及其与血清HBV-DNA、创』等的相关性；并通过构建慢病毒载体，研究SATBl对慢性乙肝细胞免疫功能的影响，进一步明确SATBl在慢性HBV感染发病中的作用。方法收集2011年1月至2013年9月在浙江大学附属第一医院就诊的慢性乙肝初次发病患者57例，分离外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25一Tconv细胞。通过激光共聚焦免疫荧光技术(Confocal)、RT-PCR及流式细胞技术检测Treg细胞、Tconv细胞内SATBl的表达水平及其与血清HBVDNA载量、剐』、AST和TBiL的相关性。对接受抗病毒治疗的15例慢性乙肝恢复期患者进行随访，分析其HBVDNA

6、、√岍和Treg细胞中SATBl表达的变化。构建靶向SATBlpLKO．1-puroshRNA载体和pLV-EFla．SATB1．EGFP过表达载体，与慢病毒包装质粒通过磷酸钙法共转染至HEK293T细胞，shRNA慢病毒载体转染后产生的病毒液侵染慢性乙肝患者CD4+CD25．Tconv细胞，过表达载体产生的病毒液侵染CD4+CD25+Treg细胞，通过RT-PCR、流式检测SATBl、FoxP3、CDl27、细胞因子(IFN小IL一4、IL．5)等的表达。结果1、慢性乙肝患者Treg细胞中SATBl的表达水平低于健康对照人群，差异具有万方数据温州医科大学硕士学位论文统计学意义(P

7、0．05)。3、慢性乙肝患者的CD4+CD25+Treg细胞中SATBlmRNA的表达水平与肝脏炎症标志物(剐』、AST、TBiL)和HBVDNA的表达呈负相关。4、对接受Peg．IFN—a2b单一抗病毒治疗的慢性乙肝患者在O、12、24、36、52周进行随访，结果显示患者HBVDNA