黑线仓鼠哈氏腺ss及gnrh表达模式初探

《黑线仓鼠哈氏腺ss及gnrh表达模式初探》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：Q954,Q344+.13学校单位代码：10446硕士学位论文论文题目：黑线仓鼠哈氏腺SS及GnRH表达模式初探研究生姓名：耿晓翠学科、专业：动物学研究方向：动物分子生物学导师姓名、职称：徐金会副教授徐来祥教授论文完成时间：2014年4月万方数据曲阜师范大学研究生学位论文原创性说明（根据学位论文类型相应地在“□”划“√”）本人郑重声明：此处所提交的博士□/硕士□论文《黑线仓鼠哈氏腺SS及GnRH表达模式初探》，是本人在导师指导下，在曲阜师范大学攻读博士□/硕士□学位期间独立进行研究工作所取得的成果。论文中除注明部分外不包含他人已经发表或撰写的研究成果。对本文的研究工作

2、做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确的方式注明。本声明的法律结果将完全由本人承担。作者签名：日期：曲阜师范大学研究生学位论文使用授权书（根据学位论文类型相应地在“□”划“√”）《黑线仓鼠哈氏腺SS及GnRH表达模式初探》系本人在曲阜师范大学攻读博士□/硕士□学位期间，在导师指导下完成的博士□/硕士□学位论文。本论文的研究成果归曲阜师范大学所有，本论文的研究内容不得以其他单位的名义发表。本人完全了解曲阜师范大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门送交论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅。本人授权曲阜师范大学，可以采用影印或其他复制手段保存论文，可

3、以公开发表论文的全部或部分内容。作者签名：日期：导师签名：日期：万方数据摘要季节性繁殖是黑线仓鼠（Cricetulusbarabensis）对温带生态因子季节变化的适应机制之一，也是造成其种群数量波动的重要因素。研究阐明黑线仓鼠繁殖调控的分子机制有利于制定科学高效的综合措施预防和控制鼠害，具有重要的现实意义。哈氏腺（Harderiangland,HG）亦称瞬膜深部第三眼睑腺，广泛分布在眼眶内侧。在形态上，哈氏腺存在明显的物种差异，不同发育时期其形态也有所差异，有些物种还具有明显的性别二态性特征。在功能上，哈氏腺被认为是目前未能彻底证实功能的，广泛分布在脊椎动物体内的最后的大型

4、结构。其功能除了分泌粘液，润滑眼球外，还可能涉及免疫、感光保护器以及体温调节等。已有研究证实哈氏腺具有感光作用，且其生理活动受神经-体液的双重调控。HG与松果体在功能、产物成分上有较多相似之处，例如在二者中都检出了褪黑素及其受体、生长抑素。HG可能作为松果体的“候补”结构，参与视网膜-松果体轴的组成，因此可能是调控季节性繁殖的重要靶器官。生长抑素（somatostatin,SS）能够影响催乳素(PRL)、促性腺激素（LH、FSH）等的分泌，同时SS能够通过抑制下丘脑GnRH的释放，间接影响子宫生理功能。因此，SS可能与GnRH共同参与了动物的生殖功能调控。然而，黑线仓鼠哈氏腺

5、内是否有SS的表达，其表达模式是否与GnRH有关，都尚未见报道。鉴于HG结构复杂，且功能及其调控机制不清，在本实验室前期研究克隆黑线仓鼠GnRH部分序列的基础上，初步探究了黑线仓鼠HG形态组织结构特征，通过RT-PCR克隆哈氏腺SS基因序列，并利用实时荧光定量PCR方法探究HG中SS与GnRH的基因表达模式。形态学观察和测量表明：黑线仓鼠HG为浅粉色，呈扁哑铃型，两眼球相对的一侧较小，外侧较大；长度与重量随年龄而变化，不同季节条件下，长度、重量也有差异。石蜡切片、HE染色的组织学研究表明：黑线仓鼠HG为复管泡腺，镜下明显看到腺体外有一层结缔组织被膜，被膜延伸将腺体分为许多小叶

6、。每一小叶含较多腺泡，腺泡由圆柱形或锥体形上皮细胞围成大小不一的孔腔；导管深入实质部分，有的腺腔内填充有内容物。形态及组织学的研究结果提示哈氏腺功能的活跃性和复杂性。采用RT-PCR方法克隆测序得到HGSScDNA序列489bp，注册于Genbank，登录号为：KF318861。该序列包括完整编码区序列351bp，编码116个氨基酸。14个氨基酸残基6，7，118构成SS-14肽，其中Phe、Trp形成疏水区，影响分子构象活性，其他氨基酸维持该肽环形结构。利用该基因序列进行系统进化分析，结果显示：黑线仓鼠与大、小鼠的亲源关系最近，与原鸡、非洲爪蟾、斑马鱼等亲缘关系最远，这与传

7、统分类结果一致，说明该基因结构相对保守。应用实时荧光定量PCR技术，检测不同发育时期(亚成年期、成年发情期、老年期)、不同季节（春、夏、秋、冬）黑线仓鼠哈氏腺中SS、GnRH的相对表达情况。结果发现SS、I万方数据GnRH在不同发育时期HG中的相对表达模式，呈现出老年期<成年期<亚成年期的规律，雌雄皆然。GnRH在不同发育时期的相对表达模式与在下丘脑中的研究结果也相一致，说明可能与黑线仓鼠的繁殖调控有一定联系。不同季节发情期黑线仓鼠HG中SS与GnRH的相对表达，结果显示SS与GnRH春秋季的表达量低于