鸡胚胸腺和法氏囊发育过程中shh和bmp2表达的研究

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1、分类号：Q344密级：}∥▲Y9722岳9单位代码：学号：蔓只孥10422200210934硕士t学位论文论文题日：鸡胚胸腺和法氏囊发育过程中黝和掣表达的研究、作青姓名吕艳杰专、Jk发直生物堂指导教师姓名陈忠越之业技术耳Jj务副教授2005年4月28曰原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：迄丝查口关于学位论文使用授权的

2、声明本人完全了解jJ—I东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学、校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：盖燃导师签名：心I山东大学硕士学位论文鸡胚胸腺和法氏囊发育过程中Shh和Bmp2表达的研究摘要Sonichedgehog(Shh)是脊椎动物中果蝇体节极性基因Hedgehog(片^)的问源肇闪之一，它所编码的分泌性糖蛋白是一类币要的信号传导分子，在胚胎发

3、育和器官形成过程中发挥重要作用。Bonemorphogeneticproteins(Bmps)是TGF一13信号分子超家族的成员，在多种发育过程发挥调控功能。胸腺和法氏囊属于中枢免疫器官，而且法氏囊足鸟类所特有的，它们在机体的免疫防御方面发挥重要作用。在多种组织和器官的发生过程中，Shh和Bmp2共同参与上皮细胞与问质细胞之问的相互作用，在器官发生过程中发挥调控功能。近年来对于Shh和Bmp2在胸腺中的研究集中于Shh和Bmp2对人和小鼠胸腺中T淋巴细胞分化的调控作用，而在鸡_

4、l』!胸腺、法氏囊发育过程中Shh和Bmp2的研究尚未见报道。．本试验首先利用RT—PCR

5、的方法获得了鸡的Shh基因490bp片段，将其克隆入pGEM—Teasy载体。利用重组的含Shh的质粒和已有的含Bmp2基因片段的质粒，分别进行酶切制备成线性化DNA，体外转录制备DIG标记的萨义和反义RNA探针。采用切片原位杂交方法，研究Shh和Bmp2在鸡jH：胸腺和’法氏囊发育过程的时空表达图式。结果表明，在鸡肚胸腺的发育过程中，孵化l1天时，Shh主要在被膜下上皮细胞和血管周围的上皮细胞中表达，Bmp2在被膜下上皮细胞和M质中未分化、初分化的淋巴细胞中表达；孵化13天时，Shh在胸腺小叶问被膜下上皮细胞和

6、’日J质中的J删状细胞中表达，Bmp2在胸腺小叶I’日

7、J的卜皮细胞、结缔组织的畀嗜住村细胞和胸腺d,aL内淋巴细胞样细胞中表达；孵化15天时，Shh在胸115{,J,nt。问网状上皮细胞和

8、’HJ质中的嗍状细胞t}】表达，Bmp2在胸腺小叶内中、小淋巴细胞和脚腺小叶f．JM状上皮细胞巾表达：孵化17天时，Shh在胸腺小叶f【1j星型网状上皮细胞和血管周围网状上皮细胞巾表达，Bmp2在包绕血管的上皮细胞和皮质内中、小淋巴细胞以及髓质山东大学硕士学位论文的淋巴细胞中都有表达；孵化20天时，Shh在围绕微血管的星型网状上皮细胞和结缔组织嘲状细胞中表达，Bmp2在淋巴细胞样细胞、淋巴细胞和脚腺小体周匝J的网状上皮细胞中表达，在淋

9、巴细胞中的表达较强烈。从孵化1l天剑20天，Shh在胸腺淋巴细胞中几乎不表达。在法氏囊发育过程中，孵化13天时，Shh在上皮芽内上皮细胞和结缔组织中的网状细胞中表达，Bmp2在上皮芽内上皮细胞和侵入上皮细胞问隙的，￡皿干细胞以及散在分却、大小不等、饲形或椭圆形淋巴细胞样细胞中表达；孵化15天时，Shh在粘膜下上皮细胞、滤泡内扁平上皮细胞以及ffjJ质中的网状细胞中表达，Bmp2在滤泡内’淋巴细胞，粘膜下上皮细胞和q

10、、小淋巴细胞以及fHJ质中的淋巴细胞样细胞、网状细胞中表达；孵化16天时，Shh在附着滤泡上皮(follicle—associatedepithelium

11、FAE)和滤泡ffiJ表面上皮细胞(interfollicularsurfaceepitheliumISE)以及滤泡内未分化的基质上皮细胞中均表达：孵化17天时，Shh在粘膜下扁平上皮细胞、滤泡内网状上皮细胞中表达，Bmp2在滤泡内『日J质细胞、淋巴样细胞，淋巴细胞和袖膜下上皮细胞中表达；孵化20天时，Shh在籼膜下扁平上皮细胞、滤泡内网状上皮细胞和问质网状细胞中表达，Bmp2在滤泡内的中、小淋巴细胞和滤泡问问质淋巴样细胞以及扁平上皮细胞中表达。通过本试验，研究了Shh和Bmp2这两个基I司在鸡腿胸腺和法氏囊发育过程的时空表达图式，提示Shh和Bmp