脾不统血证大鼠模型的建立及肝脏线粒体功能与蛋白质组学研究

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1、万方数据论文题目：膣丕统鱼适太鼠槿型笪建童拯旺脏线趋签功能生蛋自厦组堂研宜答辩委员会主席：隆俭教援答辩委员会成员：塞厦堡熬拯昌越数拯目丛丛王X万方数据温州医科大学硕士学位论文目录略缩表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3Abstract．．．．．⋯．．．⋯．⋯．．．．．．．⋯．⋯．．．⋯．．．⋯．．．⋯．．．⋯．．．⋯．．．⋯．．．⋯．．．⋯．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11第一部分脾不统血证大鼠模型的构建及相关指标鉴定

2、⋯⋯⋯⋯．．14I材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．142结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．183讨论与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23第二部分脾不统血证大鼠肝脏线粒体蛋白质组及其功能初步探索⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．251材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．252结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．383讨论与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．45附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．65综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．66万方数据温州医科大学硕士学位论文1万方数据温州医科大学硕士学位论文2万方数据温州医科大学硕士学位论文脾不统血证大劂旰脏线粒体的功能和比较蛋白质组学研究中文摘要背景中医理论中，认为脾为仓廪之官，后天之本，气血生化之源，其主要功能为运化水谷精微和水湿，统摄血液。长期处于饮食失

4、节、过度劳累的状态下会导致脾运化功能失调，脾气虚。在此基础上，外来因素的诱发导致脾气统摄血液功能失常，机体能量代谢异常，以及出现各种出血症状，引起中医脾不统血证候。线粒体是细胞内氧化呼吸和能量产生的重要产所，通过氧化磷酸化过程产生为细胞代谢活动提供的能量，来维持生命活动的正常进行。1991年刘友章教授首次通过中医脾与西医线粒体密切相关性而提出“中医脾——线粒体”假说。在该假说中，认为脾主运化，不仅仅指的是水谷精微在胃肠的消化吸收而产生的“外运化”过程；更重要的是营养物质在线粒体体进行生物氧化产能所代表的“内运化”过程。研究发现脾虚证患者线粒体结构和功能均存在异常，证实中医脾和线粒体之间存

5、在联系。目的1．根据脾不统血证临床病症制定的脾不统血证大鼠模型评价标准，确定脾不统血证模型复制的方法；2．分析脾不统血证大鼠肝脏病理变化，为脾不统血证提供临床诊断依据；3．揭示脾不统血证疾病状态下线粒体功能变化，从现代分子生物学角度探讨脾主运化、统血与线粒体的关系；4．筛查线粒体蛋白质组，初步了解脾不统血证大鼠肝脏线粒体蛋白质变化，从整体角度阐述线粒体蛋白质异常与线粒体功能变化的关系，从而揭示脾不统血证发生的分子生物学机理。方法1．SPF级条件下SD大鼠分四组在劳倦过度与饮食不节共同作用下，皮下注射低分子肝素钠，检测脾不统血证大鼠的相关症状表现。运用代谢笼检测24h饮食量、饮水量，抓力计

6、检测肌张力，同时观察大鼠皮毛、体重和体温，根据与人症状类似的动物表现标准确定大鼠是否出现脾不统血证；2．记录各组大鼠的血常规、凝血功能APTT与PT、血液流变学，结合各项血液数据与与人症状类似的动物表现确定大鼠是否出现脾不统血证；3．组织病理切片HE染色，观察肝细胞形态变化，电镜切片观察肝细胞内线粒体形态与数量的变化，结合生化指标分析脾不统血证与肝脏的关系；4．差速离心法粗提肝脏组织线粒体，用于线粒体功能检测；Percoll分离液纯化万方数据温州医科大学硕士学位论文线粒体，Westernblotting检测线粒体提取效果，用于线粒体蛋白质组学研究。5．Real．TimePCR测定线粒体D

7、NA(mtDNA)拷贝数；6．运用试剂盒检测脾不统血证大鼠肝脏线粒体膜电位和ATP含量变化；7．分光光度法检测线粒体呼吸链复合物I一Ⅳ活性，ATP合酶试剂盒检测线粒体ATP合酶活性，评价脾不统血证大鼠肝脏线粒体氧化磷酸化功能变化；8．同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术、Mascot软件和UniprotRat数据库对线粒体蛋白质进行鉴别定量对比分析，查找脾不统血证脾运化水谷精微与统摄血液功能失常与线粒体异常的相关性蛋白质，运用