耐药性鲍曼不动杆菌噬菌体特性和基因组及应用效果评价

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1、万方数据中图分类号．墅15；Q窆圣皇UDC610硕士学位论文学校代码密级10533耐药性鲍曼不动杆菌噬菌体特性和基因组及应用效果评价Characterization，genomlcanalysisandapplxcatlonOt一●o●●●●^bacteriophagesthatinfectsantibiotics—resistantAcinetobacterbaumanniiclinicalisolates作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：彭帆临床医学内科学湘雅三医院柏长青童贻刚论文答辩日期垄垡』

2、!查答辩委员会主席中南大学2014年5月万方数据学位论文原创性声明

3、IIIIIIIIIIIIIIlUlIIlY2687975本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：兰生蛆日期：j型旦年』月卑日学位论文

4、版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：童她日期：邕!竺年L月立日导师签名单缢日期：丝年上月丑日万方数据万方数据耐药性鲍曼不动杆菌噬菌体特性和基因组及应用效果评价摘要目的：耐药性鲍曼不动杆菌己成为医院主要的病原体，且很容易通过交叉感染在

5、医院内爆发流行，威胁患者的生命。寻找有效的预防及治疗的方法是临床亟待解决的问题。噬菌体被认为是针对耐药菌防治的一种有效手段。本论文对噬菌体消毒和治疗的有效性进行了初步研究，为防治多耐药鲍曼不动杆菌感染提供新的思路。方法t本研究根据鲍曼不动杆菌耐药严重的现状，对收集到的40株耐药性鲍曼不动杆菌进行脉冲场凝胶电泳和多位点序列分型：并以这些菌为指示菌分离噬菌体；选取其中一株噬菌体IME．AB2进行生物学特性和全基因组分析；并对该噬菌体在菌液及物体表面的消毒效果进行了探究，采用噬菌体吸入治疗小鼠多耐药鲍曼不动杆菌肺部感染，研究其

6、体内治疗效果。结果：40株耐药性鲍曼不动杆菌显示对大多数抗生素耐药，包括含酶抑制剂和碳氢霉烯类。通过脉冲场凝胶电泳可将细菌分为A、B、C共3个种克隆型，B型26(65％)株，为主要的克隆型。多位点序列分型中发现细菌共分13个ST型，以ST208为最原始ST型，ST218、ST195、ST369、ST451、ST238、ST368、ST469均由ST208分化而来，共24株(占60％)。本研究成功分离出16株耐药性鲍曼不动杆菌噬菌体，对40株菌的裂解覆盖率达78％。选取一株噬菌体IME．AB2进行研究，该株噬菌体滴度高达1

7、011pfu／ml，可以快速吸附到宿主菌表面，潜伏期和爆发时间短，在LB培养基中可以40C长期保存，反映出该株噬菌体裂解的高效能和稳定性。电镜观察显示这株噬菌头部呈二十面体结构，含有尾部结构，属于肌尾噬菌体。噬菌体IME．AB2基因组是一条环状的双链DNA分子，全长43665bp，全基因组平均GC含量为37．5％，编码82个蛋白质基因。全基因组序列己在NCBIGenBank注册(GenBankAccessionnumber：JX976549)。该株噬菌体能在4小时内使混浊菌液变澄清，并且能使器物表面的细菌数量明显减少。在

8、通过吸入治疗小鼠肺炎的研究中，小鼠肺部接种细菌后30min，4h，24h给予噬菌体治疗，分别得到100％，50％，20％的生存率；以不同MOI(感染复数)进行治疗，MOI=I时生存率100％，MOI=0．1时生存率80％，MOI=0．01时生存率60％，MOI=0．001时生存率50％，PBS组生存率只有10％。治疗的小鼠肺泡灌洗液中的细万方数据菌明显少于非治疗组，噬菌体数量没有明显差异，小鼠肺脏病理结果显示噬菌体疗效显著。结论：噬菌体对耐药性鲍曼不动杆菌具有良好的体内、外抗菌作用，为临床开发防治耐药性鲍曼不动杆菌感染的

9、制剂提供实验基础。图16幅，表13个，参考文献4l篇。关键词：鲍曼不动杆菌；噬菌体；脉冲场凝胶电泳；多位点序列分型；生物学特性；全基因组；小鼠肺炎；噬菌体治疗分类号：R515：Q939万方数据Characterization，genomicanalysisandapplicationofbacteriophagest