硫化氢脑出血后促进血肿清除的作用及机制

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1、学校代码:10285学号:20134221145SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文(学术学位)硫化氢脑出血后促进血肿清除的作用及机制FunctionandMechanismofHydrogenSulfidePromoteHematomaResolutionafterIntracerebralHemorrhage研究生姓名王义指导教师姓名贾佳程坚专业名称神经生物学研究方向出血性脑卒中所在院部医学部神经科学研究所论文提交日期2016年4月万方数据万方数据万方数据硫化氢脑出血后促进血肿清除的作用及机制中文摘

2、要中文摘要研究目的:在脑出血(ICH)后，由于血液成分进入脑实质损伤病灶周围脑组织,形成血肿。一方面，血肿对周围脑组织造成物理性挤压并升高颅压，导致原发性脑损伤，另一方面，血肿中的血液成分能降解为毒性成分，进一步加剧脑出血后脑损伤。因此，促进血肿清除对于出血性脑损伤保护及修复具有重要意义。已有研究表明，小胶质细胞（Microglia）/巨噬细胞，是出血后清除血肿的重要细胞。硫化氢（H2S））是重要的内源性气体信号分子，在中枢神经系统（CNS）疾病的治疗保护作用得到了越来越多的证实。但硫化氢对脑出血后血肿清除的作用

3、及机制尚无研究。本课题主要探讨硫化氢在脑出血后促进血肿清除的作用及机制。研究方法：（1）我们采取两种脑出血损伤模型：纹状体注射胶原酶导致的脑出血损伤模型（Collagenaseinjectionmodel，cICH）和纹状体注射自体血导致的脑出血损伤模型（Bloodinjectionmodel，bICH），假手术组纹状体注射同等量生理盐水（Saline组）。在上述脑出血模型，以westernbloting检测内源性硫化氢合成酶CBS和CSE的表达情况，在bICH模型中利用化学法检测血液中硫化氢的含量和脑出血组织的

4、硫化氢合成能力。（2）向原代小胶质细胞加入血肿成分—红细胞裂解液Lysis（RedBloodCellLysis），检测小胶质细胞CBS的表达量和吞噬红细胞的能力。利用CBSsiRNA，下调原代小胶质细胞CBS的表达，检测是否可以阻断红细胞裂解液促进小胶质细胞吞噬红细胞的作用。（3）线粒体膜电位影响小胶质细胞的吞噬功能：线粒体膜电位升高抑制小胶质细胞吞噬作用。为了探讨H2S影响小胶质细胞吞噬功能的作用机制，我们将在细胞模型利用线粒体膜电位荧光探针TMRM检测H2S促进小胶质细胞吞噬红细胞后线粒体膜电位的影响。（4）

5、将上述两种脑出血损伤小鼠在手术后分为溶剂注射组（Vehicle，Veh组）和外源性缓释硫化氢供体（ADT-OH）注射组，以检测外源性硫化氢对出血脑组织血肿清除的影响，并检测：神经功能缺损评分（Neurologicdeficitscore），右肢触碰百分比（Percentofrightpawplacement），转角百分比（Percentofleftturns），脑组织含水量（Watercontent）,从而检测外源性硫化氢对脑出血小鼠神经功能的影响。研究结果：（1）与假手术组小鼠纹状体脑组织相比，出血侧纹状体CB

6、S蛋白I万方数据中文摘要硫化氢脑出血后促进血肿清除的作用及机制表达水平在脑出血后2-5天显著升高（P<0.05），第6天开始下降，第14天表达和生理盐水组相近；CSE的表达水平在脑出血后2-5天显著升高（P<0.05），第6天开始下降，第14天表达和生理盐水组相近。与生理盐水组小鼠相比，脑出血小鼠血液中硫化氢含量在脑出血后1-4天显著升高（P<0.05），第5天下降；脑出血小鼠出血侧脑组织的硫化氢合成能力也在脑出血后1-7天显著升高（P<0.05）。（2）红细胞裂解液导致原代小胶质细胞CBS蛋白表达水平升高（P<

7、0.01）并促进小胶质细胞对红细胞的吞噬。以CBSsiRNA下调小胶质细胞CBS表达之后，红细胞裂解液促进原代小胶质细胞吞噬红细胞的作用被抑制。与加入Veh的对照细胞（Con）相比，加入外源性缓释H2S供体ADT-OH也促进小胶质细胞吞噬红细胞。（3）TMRM染色结果表明，小胶质细胞吞噬红细胞后线粒体膜电位升高，而红细胞裂解液和缓释H2S供体ADT-OH降低红细胞吞噬后小胶质细胞膜电位的升高；特别是，以CBSsiRNA下调小胶质细胞CBS内源性表达后，红细胞裂解液不再降低红细胞吞噬导致的小胶质细胞线粒体膜电位升高

8、。相应的，ADT-OH也显著降低红细胞吞噬导致的小胶质细胞线粒体膜电位升高（P<0.01）。（4）与生理盐水组小鼠相比，脑出血小鼠的出血侧脑卒中血红蛋白含量在脑出血后1-14天明显升高。在注射缓释H2S供体ADT-OH后，与Veh组小鼠相比，ADT-OH组小鼠的脑组织血红蛋白含量在脑出血后3-14天比Veh组低（P<0.05）；与生理盐水组小鼠相比，自体血导致的脑出血小鼠