补中益气汤及其益气升阳配比组方的药效和代谢组学研究

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所星交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。．学位论文作者签≤丝El期如夕夕f弘年多‘月矿铲日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版j允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本学位论

2、文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论E文l篡三薏练言文导謦爹惫雄藏k乡训矿年矿6月哆日／rIIIIlllllllllhllllllllllllllllm㈣㈣Y2623745摘要研究背景和目的脾虚证是中医的常见证候，脾虚患者常有消化吸收功能下降、营养不良、疲惫、消瘦等症状表现，现代研究表明，脾虚证与机体的消化、吸收和代谢有着密切的联系。补中益气汤是金元时期的名医李东垣创制的经典方剂，常用于脾气虚脾不升清等证，是中医益气升阳法的代表方，其中以补中益气药物黄芪佐以柴胡、

3、升麻的“益气升阳"配伍最为特色，方中黄芪为君，配伍轻清升散的柴胡、升麻，可协助益气中药助清阳上升之力。据古代文献记载，方中柴胡、升麻用量宜轻，而在文献记载和临床应用中，黄芪与柴胡、升麻的用量比例有不同情况，有待进行研究。近年来科学技术的发展为中医药的研究提供了新的方法和手段，其中代谢组学方法具有综合分析、整体归纳、动态统筹等诸多特点，与中医学整体观念和辩证论治的思想具有共通之处，因此采用代谢组学方法将可更好地研究阐释中医药的理论内涵。本论文研究将在课题组前期研究的基础之上，采用“五味偏食+控制饮食+游泳力竭”的方法建立脾虚证大鼠模型，进行补中益气汤及其配比

4、组方对脾虚证大鼠药效作用及尿液代谢组学研究，考察补中益气汤原方及其配比组方对脾虚证大鼠的体重、脏器指数、血清中淀粉酶、胃黏膜一．K+．ATP酶、小肠黏膜中钠依赖的葡萄糖转运体(SGLTl)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、肽转运体1(PepTl)、肝脏中的葡萄糖激酶(GK)、血清中乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和异柠檬酸脱氢酶(IDH)以及尿液中代谢物等的影响，比较补中益气汤与配比组方的药效差异，从药效学和代谢组学的角度验证补中益气汤原方中“益气升阳’’药物配比的合理性，探讨补中益气汤中“益气升阳”配伍的意义。研究方法1、采用“五味偏食+控制饮

5、食+游泳力竭"的复合因素造模方法建立脾虚证大鼠模型，观察并记录造模期间大鼠体重、饮食、大便、精神状态、行为变化等的改变情况，按照《脾气虚证动物模型症状量化积分表》进行症状表现计分，对比造模前后大鼠的体重和脾虚证宏观证候积分的变化情况，评价脾虚证大鼠模型是否复制成功。2、采用“五味偏食+控制饮食+游泳力竭”的复合因素造模方法建立脾虚证大鼠模型，并给予补中益气汤原方、补中益气汤去柴胡、升麻组方(以下简称为去“柴．升”组方)和补中益气汤倍柴胡、升麻组方(以下简称为倍“柴．升"组方)，考察比较补中益气汤原方及其配比组方给药治疗对脾虚证大鼠体重变化和脏器指数的影响。

6、3、在上述脾虚大鼠模型和给药实验的基础上，于实验结束后通过腹主动脉取血制备血清，摘取全胃制备胃黏膜匀浆，采用淀粉酶试剂盒测定各组大鼠血清中淀粉酶活性，采用矿．K+．ATP酶测定试剂盒(无机磷法)测定胃黏膜中旷．K+．ATP酶的活性，考察比较补中益气汤原方及其配比组方给药治疗对脾虚证大鼠血清淀粉酶活性和胃黏膜H+．K+．ATP酶活性的影响。4、制备大鼠小肠黏膜匀浆，采用Westernblot法检N4,肠黏膜中葡萄糖转运相关载体钠依赖的葡萄糖转运体1(SGLTl)和葡萄糖转运体2(GLUT2)以及肽转运载体1(PepTl)的蛋白表达水平，考察比较补中益气汤原方

7、及其配比组方给药治疗对脾虚证大鼠小肠黏膜中葡萄糖转运相关载体和肽转运体蛋白表达水平的影响。5、制备大鼠肝脏匀浆，采用Elisa试剂盒测定大鼠肝脏中葡萄糖激酶(GK)的活性；取血清，分别采用Elisa法和微量酶标法检测大鼠血清中琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)和异柠檬酸脱氢酶(DH)的活性，考察比较补中益气汤原方及其配比组方给药治疗对脾虚证大鼠体内与物质和能量代谢相关酶活性的影响。6、制备大鼠尿液检测样品，采用1H-NMR法分析各组大鼠尿液代谢物谱，依据化学位移值、峰的裂分情况、耦合常数及参考文献对代谢物谱峰进行归属，运用软件对数据进行主成分(P

8、CA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS．DA)，筛选与脾虚证及补