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1、热毒宁注射液对细菌内毒素性脂多糖致热大鼠解热作用探究［摘要］该实验观察热毒宁注射液(RDN)对细菌内毒素性脂多糖(LPS)发热大鼠的解热作用及对中枢发热介质的影响。将大鼠随机分为空白对照组、模型组、安乃近组、热毒宁注射液高、低剂量组(12,6mL・kg-l)o除对照组外，所有大鼠均腹腔注射脂多糖(LPS,80ug・kg-l)观察各组体温变化，并采用双抗体夹心ELSIA法测定发热高峰大鼠下丘脑中环磷酸腺昔(cAMP)含量和肺组织中髓过氧化物酶(MP0)含量。热毒宁注射液高剂量组能明显降低发热大鼠体温的升高程度，并且能够降低发热大鼠下丘脑中cAMP含量和肺组织中MP0含量
2、。热毒宁注射液有明显的解热作用，其作用机制可能主要与减少下丘脑中cAMP含量和肺组织中MP0含量有关。［关键词］热毒宁注射液；解热；cAMP；MP0发热是指机体在致热原的作用下，激活体内的单核巨噬细胞产生内生致热原(EP)作用于下丘脑体温调节中枢，使产热增加，散热减少而引起的调节性体温升高［1］,是外周免疫系统和中枢共同作用的结果［2］。热毒宁注射液是提取梔子、青蒿、金银花中的有效组分制备而成的复方中药制剂,临床用于治疗急性上呼吸道感染外感风热证。金银花对酵母和内毒素所致大鼠发热与2,4-二硝基苯酚所致小鼠发热有明显的解热作用，并且能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀［3-5］o
3、青篙［6］与其他药物配伍治疗SARS病人高热不退具有良好的效果，且青蒿中东浅若内酯(scopoletin)对正常体温及内毒素性发热家兔体温均有显著的降低作用［7］。临床上热毒宁注射液具有治疗外感风热的功效［8］。本实验观察热毒宁注射液对细菌内毒素性脂多糖(LPS)发热大鼠的解热作用，并探讨其可能的解热作用机制，为其临床应用提供实验依据。1材料与方法1.1动物SPF级SD大鼠，雄性，体重(200±20)g,由广东省实验动物监测所提供，生产许可证号SCXK(粤)2006-0015o饲养环境：室温(23±2)°C,相对湿度(60+10)%,正常饲养3d后供试。1.2试剂及仪
4、器热毒宁注射液由江苏康缘药业股份有限公司提供，批号100906o热毒宁注射液的化学组成通过高效液相色谱法(药典2005年版一部附录VID)测定，HPLC指纹图谱由姚新生院士课题组提供。化合物结构的鉴定使用分光光度计(Waters,USA),质谱仪(Bruker,USA),核磁共振分光仪(Bruker,USA)。热毒宁注射液中包含10种主要的化合物，分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断马钱子酸、咖啡酸、梔子昔、断氧马钱子昔、异绿原酸氏异绿原酸C和异绿原酸A,绿原酸和梔子昔为其解热作用的有效成分。安乃近注射液购自天津药业焦作有限公司，批号10052731c脂多糖（LPS）
5、购自Sigma公司，批号13H4048。cAMPELISA试剂盒购自美国ADL公司。MP0试剂盒购自南京建成生物工程研究所。体温计产自上海华辰医用仪表有限公司；冷冻离心机为德国Sartorious公司产品；酶标仪为芬兰ThermoLabsystems公司产品。1.3动物的筛选SD大鼠在试验环境中适应3d,自由进食饮水。实验前3d将大鼠置于实验环境中摸拟实验操作（包括捉拿、固定、安放温度计）以使其适应实验条件，每日用体温计测肛门温度2次（体温计插入肛门2cm,测定温度时挤出粪便），选取体温变化不超过0.5°C的大鼠作为实验用动物［9］。1.4大鼠LPS所致发热模型的建立
6、将合格大鼠（体温变化不超过0.5£的大鼠）随机分为对照组和LPS发热组，每组6只。用无菌生理盐水将LPS配置成801经腹腔注射入大鼠体内，对照组大鼠腹腔注射等体积的无菌生理盐水作为空白对照，注射LPS开始持续观察并记录大鼠体温变化，每lh测定体温1次，连续测定10h,记录2组大鼠体温的变化（AT,°C）o1.5动物分组、给药及体温变化的测定将合格大鼠（体温变化不超过0.51的大鼠）随机分为5组，每组10只：正常对照组、模型组、安乃近阳性对照组、热毒宁注射液高、低剂量组（12,6mL・kg-1,相当人临床等效剂量4,2倍）。各组给药组大鼠通过腹腔注射给予药物，模型组给予
7、等体积无菌生理盐水。给药lh后，除空白组外所有大鼠均腹部注射LPS80ug・kg-1,空白组给予等体积无菌生理盐水。注射LPS开始持续观察并记录大鼠体温变化，每lh记录体温1次，连续记录7h,以每1h的动物体温与基础体温的差值（AT,£）为观察指标。1.6下丘脑cAMP和肺脏MP0含量测定发热高峰6h腹腔注射10%水合氯醛使大鼠麻醉，断头法处死，于冰浴下迅速取出肺脏及全脑，于视交叉与灰结节之间取下丘脑组织。称取50mg新鲜下丘脑组织，加入细胞裂解液0.5mL,室温裂解30mine超声裂解1min,4°C13201Xg离心15min,取上清液采用双抗体
