经stnfri-iggfc基因修饰的树突状细胞诱导大鼠肺移植术后免疫耐受的实验研究

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2、国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在——年——月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：I塾逮这El期：导师签名：差盛亟Et期：经sTNFRi．IgGFc基因修饰的树突状细胞诱导人鼠肺移植术后免疫耐受的实验研究‘}I文摘要经sTNFRI—IgGFc基因修饰的树

3、突状细胞诱导大鼠肺移植术后免疫耐受的实验研究中文摘要目的l、在“三套管”法的基础上，建立大鼠左肺原位移植的最佳模型，为进一步研究诱导大鼠肺移植术后免疫耐受状态提供动物模型。2、建立大鼠骨髓源性树突状细胞(DC)的体外培养和扩增方法，并通过脂质体转染质粒sTNFRI—lgGFc基因，观察、测定DC细胞的生物学特性。3、探讨sTNFRI．IgGFc基因修饰的树突状细胞诱导大鼠肺移植术后免疫耐受的可能机制。方法l、外科显微放大镜下采用“三套管法”完成大鼠同种异体左肺原位移植模型，通过手术成功率、手术时间、病理学改变等指标评估模型的可行

4、性。2、利用重组大鼠粒细胞．巨噬细胞集落刺激因子(rrGM．CSF)和重组大鼠白细胞介素-4(rrlL-4)诱导Wistar大鼠骨髓细胞分化成为DC细胞，于培养第5天收集细胞分组，并行脂质体介导的质粒sTNFRI．IgGFc基因转染，第7d加入LPS刺激。第9天行DC细胞形态学鉴定和功能测定。包括形态观察、细胞免疫表型的流式细胞仪鉴定，通过制备负载供体抗原的受体DC细胞与受体脾脏T细胞性单向淋巴细胞反应．观察各组刺激T细胞增殖情况；最后采用酶联吸附试验(ELISA)测定细胞培养上清中细胞因子水平(sTNFRI、IL．12、TNF

5、．a)的含量。3、将SD大鼠做为供体、Wistar大鼠做为受体。分为对照组、imDC组、sTNFRIIgGFc．DC组，每组20只大鼠，行10例左肺原位移植。每组分别注射100ulPBS、imDC(数量为lxl06，悬于100ulPBS中)、100ulsTNFRIgGFc．DC(数量为lxl06，悬于100ulPBS中)，于术前7天、术前、术后7天共3次静脉中文摘要经sTNFR!一IgGFc基因修饰的树突状细胞诱导大鼠肺移植术后免疫耐受的实验研究注射。每组随机取5只大鼠于移植后第7天处死，做相关检测，包括受鼠脾脏T细胞的单向淋巴

6、细胞反应、血清细胞因子(IL．2、IL．4、IL．10、INF—Y、TNF．a)水平，剩余5只观察存活情况。●士旦皇口术l、完成大鼠左肺原位移植正式实验25例，20例存活，5例死亡，成功率80％。供肺灌洗到获取完成时间(10圭1)min，体外套管时间(10-J：1)min，供受体动静脉和支气管吻合时间(40-J：2)min。对移植肺(n=5)行夹闭实验，阻断右侧肺f-j，单肺通气维持20min，大鼠心跳呼吸平稳。受鼠于术后7天内均存活2、所获得的DC细胞在光镜和电镜下均表现为DC的典型形态，流式细胞仪表型检测也为典型DC的特征。

7、sTNFRIIgGFc．DC在细胞表型和MLR、细胞因子分泌上具有不成熟DC的特征：能分泌大量的sTNFRI，还能拮抗LPS的促熟作用。3、sTNFRIIgGFc—DC组刺激T细胞增殖能力弱于对照组和imDC组(p

8、了大鼠骨髓源性DC细胞的体外培养和扩增，并通过脂质体转染质粒sTNFRI．IgGFc基因，制备了具有抗LPS成熟和高表达sTNFRI-lgGFc基因的能“致耐受”的DC细胞。3、sTNFRI．IgGFc基因修饰的树突状细胞能够诱导大鼠肺移植术后免疫耐受，延长移植