联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭迁移的影响

《联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭迁移的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士学位论文联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭迁移的影响姓名：田文霞申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：陈婷梅201205联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭迁移的影响摘要目的：联氨基姜黄素(hydrazinocurcumin，HC)是一种化学合成的姜黄素衍生物，可抑制肿瘤的发生、发展和转移，但其生物利用度低，限制了在体内的应用。本课题采用脂质体纳米载药颗粒包裹联氨基姜黄素，研究联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒(HC．NPs)对乳腺癌细胞的抗肿瘤效应及其作

2、用机制，为进一步的体内应用研究奠定基础。此外，鉴于Stat3是影响乳腺癌发生、发展的重要信号分子，我们采用抗菌肽PR39携运Stat3siRNA，体外作用小鼠乳腺癌4T1细胞，研究PR39携运siRNA的可行性和有效性，并探讨PR39／Stat3siRNA对乳腺癌细胞侵袭转移的影响及其作用机制。方祛：1．以薄膜分散．超声法制备HC．NPs，利用透射电镜观察颗粒的粒径分布和形态；荧光显微镜观察纳米颗粒纳入细胞情况。2．HC．NPs体外对乳腺癌细胞生长影响及其机制：MTT法检测HC．NPs对MDA．MB．231、4

3、T1细胞增殖的影响；刘氏染色观察细胞形态学改变；FCM法检测乳腺癌细胞的增殖周期和凋亡率；Transwell法检测乳腺癌细胞侵袭和迁移的变化；Westernblotting法检测与细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移相关蛋白CyclinDl、Bcl．2、Bax、Survivin、MMP一9基金项目：国家自然科学基金NSFC30971131，重庆市科委自然科学基金2009BB50774的表达变化。3．PR39／Stat3siRNA体外对乳腺癌细胞侵袭迁移的抑制作用及其机制：荧光显微镜观察FITC．PR39／Cy3一siRN

4、A的细胞内定位；MTT法检测PR39／Stat3siRNA复合物对4T1细胞增殖的影响；Transwell法检测细胞侵袭和迁移的变化；RT-PCR法和Westernblotting法分别检测Star3及侵袭迁移相关基因MMP．9表达水平的变化。结果：1．成功制备了HC．NPs，透射电镜下为150nm左右的圆形颗粒，粒径分布N(158土11)am。荧光显微镜观察颗粒与细胞共孵育1h即能纳入细胞内，在4h达高峰。2．HC．NPs处理人乳腺癌MDA．MB．231和小鼠乳腺癌4T1细胞后，与脂质体纳米颗粒空载(NPs)

5、对照组相比，可明显抑制细胞的增殖，两种乳腺癌细胞均出现形态变圆，少数细胞内出现空泡或碎裂；FCM法检测HC．NPs处理后，MDA．MB．231和4T1细胞G2／M期比例较PBS组和脂质体纳米颗粒非载药组明显增)JH(P<0．01)，且HC-NPs处理组细胞凋亡率比对照组显著增多(P

6、-Myc、MMP-9、Bcl-2、Survivin蛋白表达显著降低，Bax表达明显增加，总Stat3水平无明显差异。3．Stat3siRNA／PR39复合物转染小鼠乳腺癌4T1细胞的最佳比例为1：90，半定量RT-PCR、Westernblotting结果显示，PR39／Stat3siRNA气转染组细胞的Stat3和MMP．9基因的mRNA及蛋白表达水平明显低于对照组，但转染效率稍低于脂质体2000阳性对照组；MTT实验、FCM检测结果显示，Stat3siRNA转染组细胞的增殖和细胞周期无明显变化，而Trans

7、well检测结果显示，单用PR39可降低4T1细胞的侵袭和迁移作用，并可协同Star3siRNA显著抑制4T1细胞的侵袭和迁移。结论：1．HC．NPs可明显抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移，并可诱导细胞凋亡，其机制可能与降低p-Star3的表达，下调JAK／STAT信号通路下游与乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭迁移相关蛋白分子的表达有关。因此，联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒作为一种新的载药系统，具有良好的应用前景。2．PR39可成功携运Star3siRNA转染乳腺癌4T1细胞，并有效降低Stat3的表达，从而抑制乳腺癌细

8、胞的侵袭迁移；研究结果还显示，尽管PR39／Stat3siRNA转染效率低于脂质体2000阳性对照组，但PR39可协同Star3siRNA显著抑制4T1细胞的侵袭和迁移，其抑制细胞的侵袭迁移能力明显较脂质体2000组增强，为siRNA载体的选择提供了新选择。关键词：联氨基姜黄素；脂质体纳米颗粒；Star3；siRNA；PR39EFFECTSOFLIPOSOMENANOPARTICLES