海洋胶原肽促进大鼠术后伤口愈合实验探究

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1、海洋胶原肽促进大鼠术后伤口愈合实验探究【摘要】目的：观察海洋胶原肽(marinecollagenpeptides,MCPs)对大鼠术后伤口愈合的影响，以期为术后营养支持提供实验室依据。方法:取120只体重为230-250g的SD大鼠，分为5组，每组24只，包括空白对照组和4个MCPs组(分别为0.667g/kg.bw>2.Og/kg.bw>6.Og/kg.bw和12g/kg.bw),空白对照组给予等体积溶剂灌胃，进行背部皮肤深达腹腔的切口手术，分别于术后第3、7、14天处死动物，各时间点8只动物。术后每

2、日观察伤口的愈合情况，进行HE染色、Masson染色，皮肤切口抗张力强度测定和務脯氨酸测定。结果：MCPs能够促进伤口恢复，增强皮肤切口的胶原纤维表达和抗张力强度。结论：MCPs可以通过改善大鼠术后的营养状况进而促进伤口愈合。【关键词】海洋胶原肽；营养支持；手术；伤口愈合【中图分类号】R719.8【文献标识码】A【文章编号】1004—7484(2013)11—0071—03实践证明，通过对住院病人进行合理正确的营养支持，加强或调整住院病人的营养状况，将会对病人的常规药物、手术治疗效果产生积极影响，提高有

3、效治愈率，降低死亡率,延长病人生命同时可以减少住院时间、降低医疗费用。然而据统计，约有20%〜40%的住院病人有营养不良，尤其是那些消耗性或慢性病的患者，营养不良的发生率更高[1、2]。营养不良，特别是蛋白质-能量营养不良对于手术后病人的预后会产生严重的不良影响，主要表现为伤口愈合不良，其发生概率达7%[3],所以通过合理的术后营养支持来促进伤口愈合一直是在临床治疗中广为重视的一个问题。本研究拟建立术后营养支持的动物试验模型，观察海洋胶原肽(marinecollagenpeptides,MCPs)对大鼠

4、术后伤口愈合的影响，以期为促进外科手术后伤口愈合的营养支持提供理论依据和实验依据。1材料与方法1.1受试物海洋胶原肽由北京中食海氏生物技术有限公司提供，淡黄色粉末状，以深海鱼的鱼皮为主要原料，经过清洗匀浆-复合偶联酶解-酶失活-脱脂-多级膜分离-渗透精制-浓缩-脱色-造粒干燥等工艺制成。1.2实验动物健康雄性SPF级SD大鼠，体重230〜250克，由北京大学医学部实验动物中心提供，合格证号为SCXK(京)-2006-2008o清洁级动物房饲养，饲养环境温度21〜23°C,湿度50%〜60%RHo1.3主

5、要仪器和试剂UV7512GD型紫外可见分光光度计(上海欣益仪器仪表有限公司)，离心机(Eppendorf5840R),XH2B型漩涡混匀器,电子天平，多功能生物信号采集系统。軽脯氨酸试剂盒购自南京建成生物制品工程研究所，其他试剂均为国产或进口分析纯。1.4实验方法1.4.1动物模型建立方法大鼠经1%戊巴比妥钠麻醉后，剃去背部皮肤，常规皮肤消毒，背部两侧分别切一个2cm长的纵行切口，同时切开肌肉，深达腹腔，然后逐层缝合肌肉和皮肤。整个过程模拟临床外科手术过程，同时手术当天计为术后第0天(postopera

6、tionday0.PODO),以此类推。1.4.2实验动物分组取120只体重为230-250g的大鼠，随即分为5组，每组24只，包括空白对照组和4个海洋胶原肽组(分别为0.667g/kg.bw、2.Og/kg.bw、6.Og/kg.bw和12g/kg.bw,相当于人体推荐剂量的3.3倍、10倍、30倍和60倍)，空白对照组给予等体积溶剂灌胃。手术当天开始，每日灌胃。分别于第3、7、14天处死大鼠，每个时间点各8只动物。1.4.3伤口愈合观察1.4.3.1肉眼观察每日用放大镜观察切口变化情况。各组于术后第

7、3天观察伤口及其周围组织的创伤反应，第7、14天观察伤口的恢复情况。术后创伤反应及伤口恢复情况统一按本实验室自制标准评定。1.4.3.1.1伤口及其周围组织的创伤反应评定：①I期反应。伤口有轻度肿胀。②II期反应。伤口及周围组织轻度水肿，皮下有散在淤血斑。③III期反应。切口有少量血痂附着，伤口及周围组织明显水肿。1.4.3.1.2伤口恢复情况评定：①优。伤口组织无肿胀,皮肤青紫现象消失。②良。伤口组织轻度肿胀，皮下淤血斑消失，青紫现象逐渐消退。③差。伤口及周围组织肿胀。1.4.3.2切口愈合的组织病理

8、学观察各组大鼠分别于术后第3、7、14天于伤口处距切口边缘约0.5cm取全层皮肤组织。左侧伤口所取组织的一半用4%多聚甲醛固定，保存待做石蜡切片及HE、Masson染色，另一半用于抗拉力检测，右侧伤口皮肤用于释脯氨酸测定和其他指标的检测。1.4.3.3胶原纤维染色（Masson染色）组织切片脱蜡至蒸馆水，苏木素染色5〜10分钟，盐酸酒精分化，流水蓝化，蒸馆水洗，丽春红酸性品红液中染5〜8分钟，蒸馆水，1%磷钮酸中染1〜3分钟，直接入苯胺蓝液