人乳头瘤状病毒(hpv)感染与抑制癌基因p16突变在食管鳞癌中的研究

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1、河北医科大学硕士学位论文人乳头瘤状病毒(HPV)感染与抑制癌基因p16突变在食管鳞癌中的研究姓名：容宇申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：刘俊峰201203中文摘要人乳头瘤状病毒(HPV)感染与抑癌基因p16突变在食管鳞癌中的研究摘要背景：食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，死亡率较高。发病率有明显的地区特点，河北省中南部，太行山地域及河南省北部是本病世界发病率最高的地区，其组织类型主要为食管鳞癌(95％)。本病早期症状不明显，易被忽视，早期治疗预后较好，中晚期患者占大多数，症状明显，预后较差，因此针对此病的病因学研究成为预防

2、、早期诊断、治疗的关键。人乳头瘤病毒(HPV)自20世纪初被发现以来，其与多种肿瘤的关系陆续得到确认。以宫颈癌为例，现已开发出针对HPV感染的相关疫苗，这成为宫颈癌预防上的一座里程碑。1982年S)，uanen首先提出HPV感染与食管癌的发生有关，1987年我国学者周健等首次在国内进行食管鳞癌与HPV感染关系的研究，之后困内外学者针对HPV感染和食管癌的关系进行了大量研究，发现在一些地区，HPV感染与食管癌有关，在另一些地区，二者之间则无关，甚至同一地区，不同研究方法和研究人员都会得出相反的结论，因此，HPV感染与食管鳞癌之间的

3、关系仍未得到确定。pl6基因是近年来发现的一种新型抑癌基因，是第一种能作用于细胞周期的抑癌基因，其在肿瘤发生发展中的作用逐渐受到重视。P16基因在肿瘤发展过程巾发生改变，究竟是何原因导致pl6基因发!qj变异，HPV感染是否是导致食管鳞癌中p16基因变异的原因仍未得到证实。目的：本研究旨在应用聚合酶链反应技术(PCR)联合DNA探针技术对河北省中南部地区食管鳞癌患者HPV感染情况进行研究，以明确二者之间的关系，为进一步研制HPV疫苗提供依据。本研究应用单链构象多态性(SSCP)技术对标本pl6基因第二外显子突变进行初筛，以明确其

4、在食管癌发病过程中的变化以及HPV感染与p16基因突变的关系。方法：对47名河北省中南部地区食管鳞癌患者以及37名河北省石家庄+市健康志愿者食管组织进行取材，采用QIAampDNAminikit试剂禽提取组织DNA，应用LINEARARRAYHPVGenotypingTest试荆盒对中文摘要所提DNA进行PCR以及HPV分型检测，所有标本均使用13-Globin作为内对照，检测DNA质量。除试剂盒阳性、阴性对照外，同时采用HPV阳性宫颈癌组织做阳性对照，DEPC水做阴性对照，并采用HPVE6基因引物对标本DNAHPV感染情况进行

5、复检，排除由于实验操作、污染、技术、设计等问题造成的假阴性及假阳性结果。HPV感染检测完成之后，使用标本DNA进行SSCP分析：应用p16基因第二外显子引物对组织DNA进行PCR(为使SSCP结果敏感性提高，将p16基因第二外显子引物分为三段进行设计)，PCR产物加入变性液后高温变性5分钟，然后立即骤冷保持DNA单链状态，进行4。C恒温非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳结束后银染观察结果。统计学分析采用SPSS13．0及SAS8．0完成。结果：1食管鳞癌患者中HPV感染率O％，正常对照组HPV感染率为O％，试剂盒阳性对照呈现i5订性

6、，宫颈癌标本HPV感染呈现阳性，食管癌患者中HPVE6基因为O％，正常对照组HPVE6基因为O％，宫颈癌标本HPVE6基因为附陛，此结果和试剂盒检测结果一致。2食管鳞癌患者中pl6第二外显子基因缺失率为O％，基因突变率为44．7％。正常对照组p16第二外显子基因缺失率为0％，基因突变率为o％。以病理分期为标记分组，采用k个独立样本的非参数检验方法检验／1i同病理分期的pl6基因是否呈现差异；结果显示，渐近显著性P值为O．035，卡方值为6．691，认为痫理分期越晚，p16第二外显子基因突变率越商。3采用Pearson相关分析，p

7、16基因第二外显子在食管鳞癌中与性别、年龄、吸烟史、饮涌史、家族史及淋巴结转移的渐进显著性P值分别为：0．496、O．143、0．000、0．547、0．113、O．005。4以HPV感染为标记分组，检验HPV感染与否与pl6基因变异是否有关，采刚Fisher确切概率法，p>O．05，无统计学意义，说明HPV感染与p16基因第二外显子在食管鳞癌中的变异无关。结论：1中国河北省中南部地区ttPV感染与食管鳞癌无关。HPV感染可能不是食话；鳞癌的病冈。中文摘要一————_二——————————————————————————————

8、———一2p16基因第二外显子基因变异与食管鳞癌有关。3食管鳞癌病理分期越晚，p16基因第二外显子突变越明显。p16基因第二外显子突变与患者吸烟史及淋巴结转移情况有关。4HPV感染可能并非食管鳞癌中p16基因第二外显子突变的原因。关键词：食管鳞癌；HPV；p16