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《轮状病毒生物学性状的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、病毒学杂志,轮状病毒生物学性状的研究郭进林吴惠联韩文清孟红张凤竹山东省医学科学院基础医学研究所,挤南李德荣黄样瑞黄志尚中国军事医学科学院五所,北京提要对最常,,,株应用的个轮状病毒标护株人的株牛的株猴的、。,。进行了形态学培养特性及理化性质的比较观察与检测它们在细胞上的培养特,在,电泳图具有典型的电泳带分布模式性基本相同电镜下呈现特有的形态结构、、、,。规律各项理化性质亦与文献报道一致表明的细胞适应株的生物学。性状有相当高的稳定性一〔’一“’。人与动物的若干细胞适应株已应用于感染的各种研究中我们刘其中应、,用最广泛的个标准株进行了形态学培养特性及理化性质的观察与检测以比较其生,。
2、物学性状的差异并检查其经长期实验室传代后的稳定性材料与方法一、。,,病毒株人之株与牛之株为中囚医学科学院医学生物学研,,。。究所惠赠猴之株为中国预防医学中心卫生研究所惠赠株病毒均用,一℃备用。细胞传代冻存于、。咯二细胞恒河猴胚肾传代细胞系弓自上海第一医学院门属儿童医院病。“,。毒室用含新生牛血清的常规传代培养形成单层细胞时使用三、,。毛细。声株在胞上的培养特性将病毒浪用含胰蛋白酶,,。、,声的液于℃下作用分钟鱿不作此处理接种于细胞维持液用,,。胰蛋白酶的掖℃静置培养分别于不同结养时间观察出现清况、,。四习形态学观察出现的细胞培养物按常规制超薄切片电镜观察将,。培养上清掖进行常规滴
3、膜负染或作免疫电镜观察旧、‘,。五病毒滴定按常规方法在孔塑料培养板的单层细胞培养上滴定病毒的感染滴度维持液为含群胰蛋白酶的。才丈一月日汉到文于年病霉学杂态,、’、,。、、,‘。六对温度的敏感性试验在细胞培养仁丈的侧均于时收获、、,‘、、,、、于’下分别枚置小时室温℃下小时℃下、,、、。一一,、。、’小日下分全巾然后作一稀释接种于孔培养板的,。,对。单层细胞接种录孔钉孔巾加入含加胰蛋白酶的维持液于。温箱中℃培养七、、、、、耐酸性试验将各株病毒于的条件下作用小‘,’,。。同上法接种孔沟细胞、,,、乙醚氯仿及胰蛋白酶灭活试验将各株病毒分别用乙醚氯仿于空、、、。温℃作用小时用胰蛋白酶于℃
4、作用小时同前法接。。利细胞、,九过滤试验病毒悬液用加压法通过那与川玫孔滤膜过滤滤液按常规传,。、。代法接种于细胞以上五一九项,均于‘培养观察。、,十病毒电泳分析按常规方法由病毒悬液中直接提取用聚丙,,,烯酞’垂直板型凝胶电泳胶厚电极缓冲液为一甘氨酸缓冲液在恒流条件下,,。℃电泳小时电泳后用硝酸银染色进行基因图型分析、,“十一病毒浮力密度测定病毒液经浓缩提纯后进行等密度离心,,,,,,角度转头加小时分部收集后测各管折射率据下式计算‘,。一。病毒粒子的浮力密度浮力密度结果、。‘,,,一在细胞上的培养特性和于接种后培养至约小时株约,。,、,小时开始出现先是细胞界面变得不清晰随后细胞变圆
5、聚集或发生融合,,。,‘十感染细胞内颗粒增多折光性减弱接着细胞溶解和达时约需小,。工,时约需天和在接种前用胰蛋白酶处理或否对的出现时间无明。必,,显影响须经胰蛋自酶处理后再接种细胞否则即使培养夭以上也不出现或。仅有轻微图、,二形态学观察电镜下观察感染细胞的超薄切片可见到存在于细胞浆中的病毒。,粒子具有特有的形态不同发育阶段的病毒及其前体物质大量聚集在一起构成成团。,的毒浆包汤体病毒培养上清液的负染标本可见到具双层或单层衣壳的实心或空心,,。病毒颗粒内层衣壳国绕核心成放射状排列均呈现特有的形态结构免疫电镜,。可见到明显的抗原抗体复合物凝集颗粒呈晶格排列颗粒之间以抗体桥连接图、、,,
6、。三病毒滴定和株的滴度分别为和四、。对温度的敏感性它们对温度的敏感性略同在℃小时室温℃,℃小时,℃分钟均可耐受。℃分钟以上始灭活。小时在同样温度时,比,。间下和滴度降低得快、,,五耐酸试验能耐受和但在时作用小时滴度有明显降病毒学杂,柑志气图轮状病毒生物学性状的研究,正常二。一细胞感染株小时的感染株小时的感染株小时的感染。株小时又,。。,毒浆中可见细顺粒纤维丝及发育阶段不同的毒粒感染小时,,右下可见管状结构的毒浆。‘,兔一,呈,,,一七室了室‘,亡巴甲尸亡了刀主口主。,,念,,二。。,户,勇,功,产,病娜学杂志,生感染再株小时“,培养上清液中的株病毒粒子,株培养上清的免疫电镜,病毒
7、粒之间可见抗体桥,。,轮状病毒的聚丙烯,,,一曦胺凝胶电泳图株株人株患儿类便中的主丫气卜于,,,“,,五有,,了,,,,二几,一刀。低,乙,,。,六醚氯仿与胰蛋白酶灭活试验用乙醚或氯仿作用小时或病毒学杂念,亡玉,。胰蛋白酶作用小时均不能灭活、,七滤过试验株均容易通过邓与产滤膜滤后感染滴度无明显降。低、。八病毒电泳分析个标准株的核酸电泳结果如图其基因组的个核、、、。酸片段均有典型的电泳带分布模式规律株的特点是基因组的第一、,、,、,、、姐间距较大相距较近第二组问距较大而第三组之,,
