硫酸钙复合鹿瓜多肽人工骨材料的实验研究

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1、万方数据答辩委员会主席：殷国勇答辩委员会成员：题垦重匿渔嘘黄墓整王自阳论文答辩日期：二0一四年五月万方数据温州医科大学硕士学位论文目录英文缩写一览表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯··DOIO0⋯⋯⋯⋯⋯·0Q⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·0010⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··15分析与讨论⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··27，j、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯······⋯⋯⋯·⋯⋯·⋯··⋯⋯····⋯⋯·⋯·······⋯··30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·31附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯1001⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10⋯·DOQte⋯⋯⋯·34致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯··⋯O0⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··42万方数据温州医科大学硕士学位论文一—————

3、———————————————————————————————————————————————一英文缩写一览表———————————————————————————————————————————————一简写英文全称史銮全整DMEMDulbecco，sModifiedEagle’SMediumDMEbl培养基PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲溶液SEMScanningelectronmicroscope扫描电镜BMPBonemorphogeneticprotein骨形态发生蛋白TGF．ptransform

4、inggrowthfactor-13转化生长因子～BHEHematoxylin．eosin苏木精一伊红染色RNARibonucleicAcid核糖核酸mRNAMessengerRibonucleicAcid信使RNAALPalkalinephosphatase碱性磷酸酶CSCalciumSulfate硫酸钙CCK-8CellCountingKit．8细胞计数工具一8RT-PCRreal-timepolymerasechainreaction实时聚合酶链反应PCCPrimarycellculture原代细胞培养CCPCervusandC

5、ucumlsPolypeptide鹿瓜多肽ODopticaldensity一童鏖————————————————_——————————————————————————————————————————一一——一1一万方数据温州医科大学硕士学位论文硫酸钙复合鹿瓜多肽人工骨材料的实验研究中文摘要目的：本研究利用Q一半水硫酸钙与鹿瓜多肽注射液，按照一定的比例，经过特定的复合过程，将其转化为具有生物活性的复合人工骨材料。并从材料的理化性质、生物相容性以及成骨活性三方面对制备的骨材料进行检测。本研究为进一步研究硫酸钙的骨缺损修复机制和临床上应用这

6、种骨材料提供初步的实验研究基础。方法：一、硫酸钙／鹿瓜多肽复合人工骨材料的制备及理化性质检测。将鹿瓜多肽注射液与双蒸水分别按照1：0、1：1、1：2的比例混合均匀，作为固化液。然后将Q一半水硫酸钙适量固化液混合，充分搅拌混匀，至混合物呈凝胶状后，将浆料注入不同规格的模具内，常温下待液体挥发，固化，最后环氧乙烷消毒。扫描电镜下观察材料表面形态，压力测试仪检测复合人工骨的抗压性能。二、硫酸钙／鹿瓜多肽复合人工骨材料的生物相容性研究。根据体外材料毒性评价标准IS010993--5及GB／T16886—1，从细胞水平和动物水平两方面进行以下实

7、验：A、CCK8细胞毒性试验，B、电镜下细胞在材料表面粘附试验，C、体内急性毒性反应试验，D、溶血实验，E、骨缺损植入试验。三、硫酸钙／鹿瓜多肽复合人工骨材料的成骨活性研究从体内和体外两方面实验综合评价硫酸钙／鹿瓜多肽复合人工骨材料的成骨活性A、体外试验：以复合人工骨的培养基浸出液来培养成骨细胞，ALP试验评价成骨细胞增殖活性，Qrt—pcr检测相关成骨活性因子的表达水平。B、体内试验：制作兔股骨远端骨缺损模型，然后分对照组和不同的实验组，各组分别植入相关的人工骨，分批于术后2周、4周、8周及12周处死，观察以下指标：1、动物一般情况

8、观察；2、术前及术后各时间点平片观察人工骨的降解以及新骨形成的情况；3、标本常规病理切片，HE染色观察成骨情况。结果：一、硫酸钙／鹿瓜多肽复合人工骨材料的制备及理化性质检测。按照上述制备方法，得到不同规格的人工骨材料。电