甲状腺相关性眼病(tao)静脉血单个核细胞差异表达microrna的初步筛选

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2、⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．．．⋯23g_-部分．TAO静脉血单个核细胞差异表达microRNA的验证⋯．24材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24结果⋯⋯．⋯⋯⋯．．⋯⋯．．．⋯．．．⋯⋯⋯．．⋯．29讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．31小结⋯⋯．．．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯34参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35致谢⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．38综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯．⋯⋯．．39参考文献．．．．⋯．．⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯44学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．47万方数据温州医科大学硕士学位论文甲

3、状腺相关性眼病(TAO)静脉血单个核细胞差异表达microRNA的初步筛选摘要目的甲状腺相关性眼病(TAO)的发病机制复杂且尚未明确。本文旨在以免疫学机制作为切入口，初步筛选出甲状腺相关性眼病患病组与正常对照组表达差异的microRNA，为进一步研究与甲状腺相关性眼病相关的特异性microRNA以及功能探索打下基础，也为寻找临床上甲状腺相关性眼病的特异诊断指标，以及治疗新靶点提供新的角度。方法收集正常对照组、TAO静止期组和TAO急性期组各3例外周静脉血，提取人外周血单个核细胞(Peripheralbloodmononuclearcells，PBMC)，提取RNA做新一代高通量microRNA

4、测序，构建TAO及正常对照组的microRNA表达图谱并分析，筛选出不同组别差异表达的microRNA，选取TAO静止期组与正常对照组、TAO急性期组与正常对照组之间共同差异表达明显的4个microRNA。然后利用实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR，qrt—PCR)技术，在正常对照组、TAO静止期组和TAO急性期组各5例的扩大样本中验证上述筛选出的microRNA。结果1．microRNA测序结果：TAO静止期组与正常对照组相比，T检验P值<0．05，且相差倍数>2的microRNA共有17个，分别为：hsa—miR-3155a、hsa-miR-6718—5p

5、、hsa—miR一939—3p、hsa—miR一653、hsa—miR一4433-5p、hsa-miR一378a-3p、hsa—miR一3160—3p，hsa—miR-1298，hsa-miR-4646—3p，hsa-miR-6503-3p，hsa—miR一378c、hsa—miR一18b-3p、hsa-miR一2467—5p、hsa-miR-548c一5p、hsa—miR一19a一5p、hsa—miR一30c-2-3p、hsa-miR一3136-5p、hsa—miR一629—3D。TAO急性期组与正常对照组相比，T检验P值2的microRNA共有34个，分别为：hsa

6、—miR一6515—3p、hsa—miR一1306—5D、hsa—miR一4797—3p、hsa—miR一1306—3p、hsa—miR一424—3p、hsa—miR一5001—5p、hsa—miR一6718—5p、hsa—miR一4640-3p、hsa-miR一4680-3p、hsa-miR一3615、hsa—miR一379—3p、hsa—miR一450a一3p、hsa-miR-4635、hsa-miR一99a-5p、1万方数据温州医科大学硕士学位论文hsa—miR-490—3p、hsa—miR-642b一3p、hsa—miR-548c一5p、hsa—miR一455—5p、hsa—miR一4

7、761—3p、hsa—miR一6513—5p、hsa—miR一382—3p、hsa—miR一215、hsa—miR一19a一5p、hsa—miR一30c一2—3p、hsa—miR一30c一1—3p、hsa—miR一940、hsa—miR一146a一3p、hsa—miR一659—3p、hsa—miR一199a一3p、hsa—miR一125b一1—3p、hsa—miR一1299、hsa—miR一655