塔斯品碱及其衍生物对乳腺癌生长的抑制作用及分子机制研究

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1、博士学位论文塔斯品碱及其衍生物对乳腺癌生长的抑制作用及分子机制研究申请人：展颖转学科专业：药物分析学指导教师：贺浪冲教授2012年9月万方数据万方数据InhibitoryEffectofTaspineandItsDerivativeonBreastCancerandtheMolecularMechanismAdissertationsubmittedtoXi’anJiaotongUniversityinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofDoctorofMedicineByYingzhuanZhan(

2、PharmaceuticalAnalysis)Supervisor:Prof.LangchongHeJune2012万方数据万方数据摘要论文题目：塔斯品碱及其衍生物对乳腺癌生长的抑制作用及分子机制研究学科专业：药物分析学申请人：展颖转指导教师：贺浪冲教授摘要乳腺癌是一种是危害女性健康最常见的恶性肿瘤之一，具有发病率、死亡率高等特点。目前，药物干预是乳腺癌的主要治疗方法，近年来抗乳腺癌药物开发取得了较大的进展，然而由于乳腺癌发病机制的复杂性和演变的不可预知性，还尚未寻找出有效的预防和治愈乳腺癌的方法。因此，不断研究开发新型的抗乳腺癌药物显得尤为重要。由于天然植物

3、中所含成分多样，化学结构新颖，从天然植物中寻找活性成分，大规模快速筛选具有抗肿瘤活性的先导化合物，通过化学结构的修饰与改造，得到低毒、高效的新型药物是当今抗肿瘤药物研究与开发的热点。塔斯品碱是本实验室采用细胞膜色谱模型首次从陕西秦巴山区特有药用植物红毛七中筛选得到的化合物，具有多种药理活性，能够抑菌、抗炎、促进伤口愈合，抑制S180肉瘤生长。本研究通过体外和体内实验考察了塔斯品碱及其结构修饰后的衍生物HMQ1611对乳腺癌生长的影响，并对其作用机制进行了系统研究，旨在为开发新型的抗乳腺癌药物提供依据。本研究的主要内容和结果包括以下几个方面：1.塔斯品碱对乳腺癌

4、的抑制作用体外培养乳腺癌细胞ZR-75-30，采用MTT法考察了塔斯品碱对乳腺癌细胞活力的影响，流式细胞术检测塔斯品碱对细胞周期和凋亡的影响，westernblotting和RT-PCR测定塔斯品碱对ERα及其相关受体PRmRNA和蛋白表达的影响，结果表明，塔斯品碱能够抑制乳腺癌细胞增殖，阻滞细胞周期于S期，诱导细胞凋亡，下调ERα和PR表达。建立了ZR-75-30裸鼠移植瘤模型，对塔斯品碱的体内抗乳腺癌作用进行了验证，塔斯品碱连续给药后显著抑制了肿瘤的生长。建立了利用HPLC-MS检测塔斯品碱作用后两种EGFR高表达细胞，A431和HEK293/EGFR细胞

5、内和细胞外塔斯品碱的含量的方法，并结合建立的两种细胞的细胞膜色谱模型研究了塔斯品碱和EGFR的相互作用，然后采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和实时荧光定量多聚酶链反应（real-timePCR）考察了塔斯品碱对EGFRmRNA和蛋白表达的影响。结果显示，随着塔斯品碱作用浓度的增加，进入细胞的药物浓度相应增加，塔斯品碱可以作用于细胞膜上的EGFR，抑制细胞EGFR的表达。以上结果说明塔斯品碱通过下调ERα和EGFR的表达，抑制乳腺癌的生长。I万方数据西安交通大学博士学位论文2.塔斯品碱衍生物HMQ1611对乳腺癌的抑制作用采用MTT法考察HMQ1611对四种乳

6、腺癌细胞活力的影响，流式细胞仪检测HMQ1611对细胞周期和凋亡的影响，并运用siRNA干扰和质粒DNA瞬时转染验证HMQ1611是否以ERα为作用靶点。结果表明，HMQ1611能够抑制四种乳腺癌细胞的增殖，阻滞细胞周期于S期，诱导细胞凋亡。HMQ1611对ERα阳性乳腺癌细胞的抑制作用优于对ERα阴性乳腺癌细胞，采用siRNA干扰的方法沉默ZR-75-30细胞中ERα表达后，与对照组相比，抑制作用降低，而向MDA-MB-231细胞中转染ERα后，与对照组相比，抑制作用增强，说明ERα是HMQ1611的作用靶点。采用westernblotting和real-t

7、imePCR检测HMQ1611对ERα和EGFR信号通路的影响，结果显示，HMQ1611能够下调ERα的mRNA和蛋白表达，抑制E2激活的MAPK通路，降低EGFR磷酸化水平及其下游信号级联反应MAPK和PI3K/Akt，说明HMQ1611通过下调ERαmRNA和蛋白表达，阻断E2的基因组通路和膜ERα所介导的E2激活的MAPK通路，同时抑制EGFR的活性，继而阻断其下游的信号级联MAPK和PI3K/Akt通路。建立了ZR-75-30裸鼠移植瘤模型验证HMQ1611的体内抑瘤活性，发现HMQ1611能够显著抑制裸鼠移植瘤的体积和瘤重，并且在整个实验过程中，与对

8、照组相比HMQ1611给药组小鼠的体重