还原型谷胱甘肽对大刀肝纤维化timp-1、tgf-β1表达影响的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文还原型谷胱甘肽对大刀肝纤维化TIMP--1、TGF--β1表达影响的实验研究姓名：杨颖申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：王爱民201203中文摘要还原型谷胱甘肽对大鼠肝纤维化TIMP．1。、TGF—pl表达影响的实验研究摘要目的：肝纤维化是一类严重危害人类健康的疾病，是多种慢性肝损伤的共同后果，如果不加以控制及治疗，则会进一步发展为肝硬化甚至肝癌。正常情况下，肝纤维化促进因子与抑制因子之间存在着动态平衡，彼此互相制约，肝功能保持稳定。肝星状细胞(hepaticstellatecell，

2、HSC)活化是肝纤维化发生的核心环节，活化的HSC通过旁分泌和自分泌作用合成并分泌多种细胞外基质(extracellularmatrixes，ECM)，同时合成并且释放大量金属蛋白酶组织抑制物(tissueinhibitorsofmetalloproteinases，TIMP)，抑制胶原酶、明胶酶等基质金属蛋白酶的活性，减少了ECM的降解，从而导致ECM合成大于降解，最终导致过量ECM积聚在肝内形成肝纤维化。金属蛋白酶组织抑制因子．1(TIMP．1)和转化生长因子(transforminggrowthfactor，

3、TGF)．131是目前已知最重要的促肝纤维化因子，TGF一91是在肝纤维化启动、进展乃至肝硬化形成中起核心作用的细胞因子，是激活肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSC)并促进其分泌ECM的关键因素，TIMP．1与肝纤维化的发生及发展密切相关，在肝纤维化形成过程中起到重要的作用，它可通过抑制脚1、MMP3对I、III型胶原的降解，来促进肝纤维化形成。缺氧是各器官组织细胞最常见的源头损伤因子之一，也是常见的协同损伤因子，大量实验证明，缺氧促进了肝纤维化的形成和进一步发展，炎症反应及自由基损伤贯穿肝

4、纤维化的始终。还原型谷胱甘肽(reducedglutathionehormone，GSH)作为生物体内自由基防御系统中的重要物质，对生物体内氧化产生的自由基能高效率的清除。并且作为体内最重要的生物抗氧化剂，其在维持内环境的相对稳定以及细胞膜的保护方面亦起到相当重要的作用。对于肝脏这个人体的“代谢工厂’’，还原型谷胱甘肽在改善肝功能、恢复肝脏酶的活性、保护肝细胞膜及解除外源性有毒物质毒性的功效方面，发挥着非常积极的作用，GSH现已在临床上被广泛应用。虽然如此，但其作用机制尚不十分清楚。本研究以还原型谷胱甘肽作为人工干

5、预手段，通过实验证实其在人工诱导下的肝纤维化进程中对中文摘要TIMP．1及TGF．B1表达的影响，以期对治疗肝纤维化增加新的思路和方法。方法：l实验动物：健康8Wistar大鼠110只随机分为3组：包括正常对照组30只及模型组40只及药物干预组40只。正常对照组，即腹腔内注射生理盐水，2次／周，剂量2ml／Kg；模型组，即腹腔内同时间点注射四氯化碳，2次／周，剂量2ml／Kg；药物干预组，除在模型组注药基础上，另腹腔内注射GSH，1次／日，剂量50mg／Kg，分别在注射药物第1周、第2周、第4周、第8周、第12周时

6、间点随机选取6只大鼠处死。分别取部分大鼠肝组织以中性甲醛溶液固定、石蜡包埋，多聚赖氨酸涂布的载玻片制作4岬组织病理切片，用于HE染色及免疫组化。2检测指标：HE染色观察肝脏组织的病理学变化，观察大鼠肝纤维化的程度，利用免疫组化染色方法分别检测不同组别及各时间点肝大鼠纤维化中TGF—D1及TIMP一1的表达情况。3数据统计与分析：阳性指数检测值以均数土标准差表示，分别在同时间不同组别间采取单因素方差分析，采用SPSSl6．0统计软件进行分析，P<0．05为差异有统计学意义。结果：1大鼠肝组织病理形态学改变：模型组大鼠

7、肝内均出现明显纤维化，随时间延长，纤维化程度逐渐增强，纤维组织延伸形成完全或不完全分割的纤维间隔。药物干预组在肝纤维化程度上较模型组减轻，多数小叶结构清晰，纤维组织仅少量增生。2免疫组化TGF．131及TIMP．1表达：正常肝组织内偶可见TGF．D1及TIMP．1表达，模型组及药物干预组随着纤维化进程进展，肝纤维化程度加重，TGF．p1及TIMP．1表达亦逐渐明显，表达数量及表达空间扩大，但药物干预组较模型组明显减轻。染色阳性指数比较三组在不同周次间TGF．Dl，TIMP．1的差别，除第一周对照组与干预组无差别外，

8、其余各组间比较均有统计学意义。结论：TIMP．1及TGF．pl在四氯化碳诱导大鼠肝纤维形成的过程中，其组织表达水平逐渐升高；而药物干预组与模型组相比，肝组织纤维化速度及程度得到了有效遏制，延缓了肝纤维化的进程，TIMP．1及TGF．D1在肝中文捅要脏中的表达明显减少。但是，单纯GSH药物干预未能逆转肝纤维化，仅延缓了肝纤维化的进程，说明肝的纤维化过程复杂，除