绵羔羊jivet技术相关影响因素的研究

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1、分类号：密级：学号：2009108010单位代码：10759石河子大学硕士学位论文绵羔羊JIVET技术相关影响因素的研究研究生郭洪石国庆（研究员）指导教师万鹏程（副研究员）申请学位门类级别农学硕士学位学科、专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向动物繁育技术所在学院动物科技学院中国新疆石河子··2012年6月EffectsofsomefactorsonJIVEToflambsADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultu

2、reByGuoHong(AnimalGenetics,BreedingandReproduction)DissertationSupervisor:Researcher.Shiguo-qingJune·2012学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果据我。所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。。研究生签名：时间：年月日学位论文版权授权书本人完全了解石河子大学有关保留使用学位、论文的规定，学校有权保留学位论文并向

3、国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版有权将学位论文用于赢利目的的。少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅有权将学位论文的内容编入有关数据进行检。索有权将学位论文的标题和摘要。汇编出版保密的学位论文在解密后适用本规定。。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日本研究经费资助由国家自然科学基金项目基于羔羊体外成熟卵母细胞转录组分析及核质成熟相关机制研究项目编号31160460兵团博士基金优质绵羔羊卵泡资源库高效利用技术研究项目编号2010JC10国家科技支撑项目子课题超细型细毛羊新品种(系)选育与关键技术研究项目编号2011BAD28B05-1-1Thepr

4、esentstudywassupportedbygrants(31160460)fromtheNaturalScienceFoundationChina，BintuanPhDFoundation(2010JC10)andNationalKeyTechnologiesR&DProgram(2006BAD14B08-05)摘要幼畜胚胎体外生产技术（JIVET）是集幼畜超数排卵，卵母细胞的体外成熟和体外受精，胚胎体外培养和胚胎移植技术为一体的生物高新技术体系。本研究就羔羊卵母细胞体外培养体系优化，品种对羔羊超数排卵和卵母细胞发育能力的影响以及羔羊和成年羊卵母细胞核质成熟比较、

5、囊胚细胞数量比较。为建立高效的幼畜胚胎体外生产技术体系进行理论探索研究。实验一，研究了在成熟液中添加不同浓度的EGF和β-巯基乙醇对羔羊卵母细胞发育能力的影响及其和成年羊卵母细胞体外发育的不同。并将体外受精胚胎进行了移植，为研究利用绵羊羔羊卵母细胞生产后代提供理论和技术方法。研究结果表明，添加不同浓度的EGF对哈萨克羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率影响不显著（P>0.05）。成熟液中添加100μMβ-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞囊胚率（P<0.05），但对卵裂率影响不显著（P>0.05）。羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率均显著低于成年羊（P<0.05）。添加100μMβ-巯基乙醇

6、能显著提高羔羊卵母细胞正常受精率（P<0.05），且与成年羊卵母细胞受精率差异不显著（P>0.05）。未添加β-巯基乙醇多精入卵率显著高于成年羊（P<0.05），而添加100μMβ-巯基乙醇多精入卵率与成年羊差异不显著（P>0.05）。成熟液中不添加β-巯基乙醇时未受精率（20.0%）高于成年羊组（12.3%）和β-巯基乙醇（13.5%），但差异不显著（P>0.05）。实验结果表明，β-巯基乙醇能提高哈萨克羔羊卵母细胞发育能力，提高正常受精比例并减少多精子受精的发生。但羔羊卵母细胞发育能力仍显著低于成年羊。哈萨克羔羊卵母细胞体外成熟、受精和发育获得的2-8细胞胚胎进行输

7、卵管移植，14只受体羊中7只妊娠，妊娠率为50.0%；共产羔9只，其中8只存活。实验二，比较羔羊和成年羊卵母细胞核成熟和质成熟，研究两种卵母细胞间的差异。实验分别对羔羊和成年羊体外成熟培养0、6、12、18和24h的卵母细胞取样后对α微管蛋白和染色体进行免疫细胞化学染色，以研究羔羊和成年羊卵母细胞核成熟的差异；分别对羔羊和成年羊体外成熟培养12和24h的卵母细胞取样后进行皮质颗粒染色，以比较羔羊和卵母细胞质成熟情况。结果表明，羔羊和成年羊卵母细胞在0h和6h时大部分处于GV和GVBD期。0h时羔羊卵母细胞处于GVBD期的卵母细胞比例显著低