大白菜brtcp24基因克隆及功能分析

《大白菜brtcp24基因克隆及功能分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、IsolationandCharaterizationofBrTCP24GeneinChineseCabbager⋯oo．．‘1hesissubmittedto(趸ngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeof—MasterofScienceTingtingTan(vegetables)Supervisor：FeiChen，JianweiGaoQingdao．ChinaMay,2012独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究

2、工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：讼I≥年关于论文使用授权的说明6月≥铝本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学

3、位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：撕鸥刷磴糍窆■-，’T【’。、二，，二≯710时间：为f)年／月≥6日时间：_f≥年易月≥6日青岛农业大学硕士学位论文摘要大白菜BrTCP24基因克隆及功能分析摘要TCP家族转录因子是植物所特有的，它含有一种特有的bHLH保守结构域。植物的叶片弯曲以及大小都可能受到TCP基因家族的影响。本试验从大白菜自交系福山包头中分离了拟南芥(Arabidopsisthaliana)“P的同源基因，命名为BrTCP24，并构建了BrTCP24基因的植物表达载体。将该基因转入拟南

4、芥，获得了相应的纯合转基因植株，对转基因植株与野生型的表型性状进行观察比较，并且在生物信息学方面对BrTCP24基因做了相关分析。主要结果如下：1．BrTCP24基因的克隆扩增出一条分子质量约为1200bp的条带，经测序，该片段为1221bp，与预期的目的片段大小一致。经PCR、酶切及测序验证，证明BrTCP24基因片段已经连接到植物表达载体pCAMBIA2300上。2．PCR鉴定转基因拟南芥采用根癌农杆菌介导的浸花法侵染拟南芥，获得了转基因植株。提取转基因拟南芥总RNA，并成功扩增到外源BrTCP24基因。3．氨基酸序列分析对BrTC

5、P24基因所编码的蛋白质氨基酸序列进行比对分析，结果表明大白菜BrTCP24蛋白质与拟南芥AtTCP4蛋白质的氨基酸序列的一致性为77．57％，核酸的一致性为77．15％。4．BrTCP24基因过量表达可能抑制了与器官大小有关的基因表达通过半定量RT-PCR检测了跟器官体积大小有关的基因AtEXPl0，还有与细胞分裂有关的基因AtCYCD3；1，AtGIFl和AtGRF5。与对照拟南芥相比，转基因拟南芥中AtEXPIO，AtCYCD3,I，AtGIFl和AtGRF5基因的表达水平减弱。这些结果表明在拟南芥的发育过程中，BrTCP24基因

6、的过量表达可能抑制了与器官大小有关的基因的表达从而使拟南芥器官变小。5．转基因植株的性状观察在含Kn的112MS培养基上，筛选植株暗处理7天，同时筛选5株长势好的植株，将其移入新的培养基和培养瓶中继续培养两周，观察并记录数据，发现转基因植株的下青岛农业大学硕士学位论文摘要胚轴明显短于野生型，而且长势弱，开花比野生型晚。为了进一步确定转基因植株，将在1／2MS培养基上生长16天的植株移植到培养土中继续培养24天，可发现转基因植株(35S：：BrTCP24)叶片明显比野生型叶片小。推测可能与转入的外源BrTCP24基因有关。关键词：拟南芥；

7、大白菜；BrTCP24基因；克隆；转基因植物2青岛农业大学硕士学位论文AbstractAbstractThetranscriptionfactorofTCPgenefamilywithaconserveddomainbHLHisspecifictoplant．TheTcPgenefamilymayaffectonleavescurlandsizeoftheplant，butitsfunctionalanalysisisnotreporteduntilnow．Inthestudy,onecDNA，designatedasBrTCP24ge

8、ne，homologoustoTcPgeneofArabidopsisthaliana，wasisolatedfromtheinbredlinenamedFushanbaotouofChinesecabba