d-半乳糖所致亚急性衰老小鼠脾脏b淋巴细胞的改变及云克的抗衰老作用

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3、急性衰老小鼠脾脏B淋巴细胞的改变及云克的抗衰老作用中文摘要衰老是机体的生理功能逐渐下降，组织器官发生退行性变化，最终走向死亡的过程。关于衰老的学说有很多，有代表性的有自由基学说、免疫学说、线粒体学说、端粒学说等。其中免疫学说是由Wolford在20世纪60年代提出的，认为免疫功能的衰退是造成机体衰老的重要因素，免疫系统从根本上决定了机体的衰老。脾脏是机体重要的外周免疫器官，是免疫细胞定居和触发免疫应答的场所，其中B细胞约占脾淋巴细胞总数的60％。B淋巴细胞既是机体产生抗体的惟一细胞，同时又是专职

4、性的抗原提呈细胞，在机体的体液免疫及细胞免疫中均发挥重要作用。机体衰老时B细胞数目下降，免疫球蛋白基因表达图谱和体细胞突变频率发生改变，从而导致机体免疫系统功能紊乱。云克(99Tc．MDP)即99Tc．亚甲基二膦酸盐注射液，目前在临床上被用来治疗强直性脊柱炎、类风湿性关节炎、甲亢伴浸润性突眼等。99Tc容易得失电子从而不断清除人体内的自由基，保护超氧化物歧化酶(SOD)的活力，抑制病理复合物的产生。因此本课题运用D．半乳糖(D—galactose)建立亚急性衰老小鼠模型，在对其进行生物学鉴定的基

5、础上，对衰老小鼠脾脏B细胞、巨噬细胞及树突状细胞的改变进行初步的探讨和分析，为进一步研究免疫系统与机体衰老之间的关系奠定一定的实验基础，并研究云克对D．半乳糖致衰老小鼠的逆转作用，为其作为抗衰老药物在临床的应用提供理论依据。第一部分D一半乳糖致衰老小鼠模型的建立及生物学鉴定1．目的：运用D．半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型。2．方法：2月龄雌性健康昆明小鼠16只随机分为两组，模型组颈后部皮下注射100g／LD一半乳糖溶液，0．25mL／20g，对照组颈后部皮下注射相同剂量的生理盐水，在建模期间观察记

6、录小鼠的生存状态和生物学行为的动态变化并定期称量其体质量。连续注射42d后，小鼠摘眼球取血，离心取血清测定其SOD和MDA。中文摘要D．半乳糖所致亚急性衰老小鼠脾脏B淋巴细胞的改变及云克的抗衰老作用3．结果：与对照组相比，建模期间模型组小鼠逐渐精神萎靡，饮食减少，毛色稀疏没有光泽，背部微微隆起，不活泼，模型组体质量与对照组相比增长缓慢；注射D．半乳糖溶液42d后模型组小鼠血清中SOD为2．16+0．43mkat／L，MDA为4．14+0．82p．mol／L，与对照组5．52+1．55mkat／L

7、、1．244-0．21lamol／L相比其SOD下降，MDA升高(尸<0．01)。4．结论：成功建立D．半乳糖致衰老小鼠模型，为进一步研究衰老小鼠外周免疫器官脾脏B淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞的改变及云克的抗衰老作用提供了实验对象。第二部分D．半乳糖所致衰老小鼠与B淋巴细胞活化、增殖、记忆相关的改变及其意义1．目的：分析D．半乳糖所致衰老小鼠模型脾脏B淋巴细胞、巨噬细胞(M(p)、树突状细胞(DC)及血清中细胞因子的改变及其意义，为对衰老机制的进一步研究奠定一定的理论基础。2．方法：取健康昆明

8、雌性小鼠，2月龄，运用D．半乳糖建立衰老小鼠模型并进行生物学鉴定后，取其脾脏，采用称重法测定其脾脏指数；取一部分制备成细胞悬液，采用免疫荧光和流式细胞术(FCM)分析脾脏B细胞、巨噬细胞(Mqo)及树突状细胞(DC)表面重要膜型分子的改变，采用MTT法测定脾脏B细胞转化刺激指数(SI)；另一部分脾脏经固定后石蜡包埋，切片，采用HE染色法观察脾脏结构的改变，采用免疫组化法(IHC)分析脾脏组织Fas的表达；采用ELISA法分析血清中IL．4和IFN．Y的浓度。3．结果：模型组小鼠脾脏指数为2．75