降糖药艾塞那肽和利拉鲁肽固相合成及艾塞那肽药效学评价

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·7鄹雷⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯’’7第一章艾塞那肽的合成、纯化及鉴定材料与方i；}⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·13结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17{寸论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22第二章利拉鲁肽的合成、纯化及鉴定材料与方i5叁⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”26结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29．i寸论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32第三章艾塞那肽体外细胞活性和体内降血糖实验材料与方i5冬⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·34结果⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“42附参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”综致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”61攻读学位期间发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”62原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·63降糖药艾塞那肽和

4、利拉鲁肽的固相合成及艾塞那肽的药效学评价研究生：张许专业：药理学导师：刘卫教授中文摘要目的：本题旨在合成多肽类降糖药艾塞那肽和利拉鲁肽，确定一条操作简单可行的固相合成路线；摸索制备型高效液相纯化两种药物的条件并得到纯度为99％以上的多肽；部分药效学实验证明艾塞那肽的刺激胰岛B细胞增殖作用和降糖作用。方法：1．合成部分：艾塞那肽和利拉鲁肽合成路线均采用固相合成法，9。芴甲氧羰基(Fmoc)合成策略，分别利用Rink酰氨MBHA树脂(负载量0．23mmol／L)和Fmoc．Gly．Wang树脂(负载量为0．27mmol／

5、L)作为载体、6-氯-1-羟基苯并三氮唑和N，N一二异丙基碳二亚胺为缩合剂，三氟乙酸为切割试剂。中间过程采用茚三酮检测鉴定是否反应完全。采用半制备型高效液相进行纯化，色谱柱为安捷伦ZORBAXSB．C18型半制备色谱柱(9．4'250mm)，流速4mL／min；波长220nm；进样量每次lmL；流动相A：水(含0．1％TFA)；流动相B：乙腈(含0．1％TFA)，摸索纯化条件收集产物峰冷冻干燥。高效液相法测定其含量，质谱鉴定产物分子量。2．艾塞那肽的部分药效学实验：采用MTT法检测其对大鼠胰岛(INS．1)细胞的增殖

6、活性作用，分别在不同浓度的本实验室制备得艾塞那肽和对照品(礼来公司的艾塞那肽注射液)干预下培养INS．1细胞，测定吸光度值看是否刺激细胞增殖，计算增殖率及ED50以对比两种药物活性是否相当。腹腔注射链佐霉素诱导小鼠糖尿病模型，成模后分为四组：(1)空白组：(2)糖尿病模型组；(3)礼来公司艾塞那肽注射液组；(4)本实验室制备艾塞那肽组。用药15d期间间隔测量血糖观察其降血糖作用。停药1周后，禁食不禁水16小时进行葡萄糖耐量试验。结果：1．合成部分：得到明确的合成路线及纯化条件，艾塞那肽洗脱梯度为：初始梯度A占90％，

7、A的比例在15min内降到67％，然后在50min内由67％降到58％，最后在5min内降到0％并保持10min。产物峰在25min左右出现。利拉鲁肽洗脱梯度1为：初始梯度A占85％，A的比例在5min内降到70％，然后在25min内由70％降到50％，保持50％10min，最后在10min内降到0％并保持10min。利拉鲁肽的产物峰在33min左右出现。收集到的产物峰冷冻干燥最终得艾塞那肽纯品51．5mg，收率为12．3％，归一化法计算纯度为99．73％。利拉鲁肽制得纯品39．4mg，收率为10．5％。归一化法计算

8、纯度为93．5％。经质谱鉴定艾塞那肽分子量为4186，利拉鲁肽为3751，与实际分子量相符。2．艾塞那肽的部分药效学实验：艾塞那肽可以刺激胰岛细胞的增殖活性，在浓度为120nmol／L时对细胞的增殖作用最强；本实验室合成的艾塞那肽与对照品艾塞那肽注射液活性相当；连续注射艾塞那肽后，样品组与对照组小鼠血糖明显低于糖尿病模型组(P<0．05)，样品