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1、第36卷 第5期海 洋 与 湖 沼Vol.36,No.52005年9月OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICASep.,2005利用细胞松弛素B抑制第一极体排放诱导3近江牡蛎(Crassostrearivularis)四倍体•阙华勇 郭希明 张国范 张福绥(中国科学院海洋研究所 青岛 266071)•(美国新泽西州立大学海洋与海岸科学研究所Haskin贝类研究实验室,PortNorris,NJ08349,USA)提要 采用细胞松弛素B(CB)处理受精卵,抑制第一极体的排放,对近江牡蛎四倍体的诱导和培育进行了研究。结果表明,近江牡蛎在25—
2、28℃时受精卵发育同步性较高。在28℃条件下,CB适宜处理剂量为0.6mg/L。在个别受精卵出现第一极体时实施处理,至对照组的第一极体出现率达到50%终止处理,四倍体的诱导效果较好。5个处理组D形幼虫的平均孵化率为11.0%,显著低于对照组72.4%的平均孵化率。在受精后4—12d期间处理组幼虫的存活率显著低于对照组。处理组胚胎和D形幼虫阶段四倍体的平均比例分别为41.8%和37.9%。四倍体的比例随着幼虫的生长发育呈下降趋势,至受精后12d在各处理组已检测不到四倍体。2组幼虫完成附着变态,从受精卵至稚贝的累计存活率平均为0.3%。本研究结果表明,使用CB处
3、理抑制受精卵第一极体的释放可以有效诱导近江牡蛎四倍体,但所获得的四倍体幼虫存活力差,需要在未来的研究中解决。关键词 近江牡蛎,细胞松弛素B,第一极体,四倍体,三倍体,非整倍体中图分类号 S917.4 海水贝类多倍体研究揭示出人工三倍体贝类(Crassostreagigas)三倍体的商业生产(Chew,一系列特殊的生物学特征,具有重要的应用价值。1994)。我国在长牡蛎等经济贝类的三倍体规模例如牡蛎三倍体的肉质和风味在繁殖季节优于二诱导培育取得了突破性进展(王如才等,2002)。倍体、且能保持周年的生长(Allenetal,1986),因但是人工诱导方法
4、对胚胎和幼虫造成的伤害不可此,三倍体对改善和丰富现有的牡蛎产品结构、实避免,导致孵化率和幼虫存活率下降,同时三倍体现周年供应优质的牡蛎水产品具有独特的作用。的不育性决定了三倍体的种苗制备需要逐年重复近江牡蛎是我国南方主要经济贝类,在广东、广西进行,造成三倍体的生产成本显著高于普通二倍大规模养殖,以营养价值高、肉味鲜美著称,是我体,这些缺点不利于三倍体贝类的产业化。国传统的出口海产品,在两广地区、香港和东南亚利用四倍体与二倍体杂交培育倍化率达地区具有广大的市场。每年夏季近江牡蛎由于性100%的全三倍体在长牡蛎率先取得的突破为三腺发育和配子排放,肉质显著下降,市
5、场上近江牡倍体贝类的生产提供了崭新的技术(Guoetal,蛎产品供应出现断档,生产三倍体有望较好地解1996;阙华勇等,2003)。该项三倍体生产技术具决这一问题。有操作简便、可控性强等优点,避免了复杂的人工三倍体贝类的人工诱导方法已得到充分的研处理过程,适合我国海水贝类养殖业。因此,贝类究,在美国等国已经利用诱导方法实现了长牡蛎四倍体技术的研发已成为近些年我国贝类多倍体3国家杰出青年科学基金资助项目,39825121号;国家自然科学基金项目,30100141号和30471326号;国家863项目,2001AA628060号。阙华勇,博士,研究员,E2mai
6、l:hque@ms.qdio.ac.cn收稿日期:2005201213,收修改稿日期:2005206217438海 洋 与 湖 沼36卷研究的焦点之一。孵化率是D形幼虫总数与受精卵的百分比,已报道的从二倍体诱导四倍体的方法包括:幼虫存活率是各期存活的幼虫数与D形幼虫总抑制受精卵第一极体的释放或同时抑制第一极体数的百分比。和第二极体的排放(Scarpaetal,1993),抑制第一1.4 四倍体的倍性鉴定次卵裂法,细胞融合法(Guoetal,1994a),以及利采用乙酸地衣红压片法观察统计4—8细胞用由三倍体产生的卵子与来自二倍体的精子受胚胎的染色体,
7、二倍体有20条染色体,三倍体和精,抑制第一极体释放的方法(Guoetal,1994b)。四倍体的染色体数目分别是30±2和40±3条,利用最后一种方法成功获得可存活的长牡蛎四倍偏离整倍体数目的分裂相为非整倍体。体。采用其他方法进行的研究大多仅获得四倍体采用流式细胞术鉴定幼虫和稚贝的倍性组胚胎,但通过抑制第一极体排放,获得了少量四倍成。过滤收集10—15万的各期幼虫样品,采用涡体稚贝(Yangetal,2000a)。旋振荡法制备成单细胞悬液,加入10mg/LDAPI迄今国内外仅见采用冷热休克和传统中药处(Sigma),利用流式细胞仪(PARTECCCA)检测样
8、理抑制卵裂的方法诱导近江牡蛎四倍体胚胎的报品的DNA
