erbb2入核机制研究初探

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1、军事医学科学院研究生学位论文独创性声明秉承军事医学科学院严谨的学风和科研作风，本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立迸行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得笙蔓医堂型学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。论文作者签字：磁签字日期：丝2年』：￡月。丝日军事医学科学院研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解垩室医堂型堂瞳有关保留、使用学位论文的规定。特授权至蔓医堂型堂院可

2、以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意将本学位论文的复印件和磁盘送交国家有关部门和机构。(保密学位论文在解密后适用本授权书)论文作者签字：指导教师签字：签字目期：趔年。[月—驾日签字日期：丝2年』二-月兰￡日甄一驻毕中文摘要ErbB2入核机制研究初探ErbB2作为细臆袭面膜受体与其它EGFR家簇成员形成异源二聚体而发挥作用．最近的研究报道Efb】眈可定位于细脆核，并作为转录因子调控某些基因的转录。对于ErbB2分子戆否入援一直存有争议。本研究第一部分将全长ErbB2融合于GFPN

3、端，发现全长ErbB2在过表达的情况下不入核。病毒蛋白PF-8的NLS亦不能有效驱动ErbB2全长分子的核转位，表明ErbB2分予的固有特性使其更倾向定位于胞膜。对ErbB2的氨基酸序列分析发现，ErbB2ICDN端含有一个假定的NLS。通过构建不同形式的ErbB2突变体，采用间接免疫荧光及激光共聚焦显微镜术观察到，ErbB2ICD具有显著的入核倾向，去除此NLS虽然不能完全阻断ErbB21CD的核定位，但对其入核可产生较明显的干扰作用。进～步研究发现，ErbB2ICD分予内蕴藏决定其缨胞内定位的重要信息，在不同转属EGFR家族成员中897位精氨酸具有高度

4、的保守性，含有s％RRRs98Z．联精氨酸的序列(残基721．970)与ErbB2胞质内定位相关。虽然ErbB2的核定位已在肿瘤组织中被检测到，但在培养的肿瘤细胞中，ErbB2入核一直未被广泛认同。肿瘤徽环境对于肿瘤的发生、发展具有至关重要的意义，特别是问质细胞与肿瘤细胞的交百作用直接影响肿瘤细胞的黏附、移动、增殖、分化和侵袭。本研究第二部分模拟体内的肿瘤微环境，将乳腺癌细胞系SKBR3细胞与纤维肉瘤细胞系HTl080共培养，发现两种细胞的共培养能促进HTl080细胞中MMP．2和MMP．9表达乃至激活，而SKBR3细胞与HTl080细胞单独培养均不能产生

5、激活形式的MMP-2和MMP-9。同时，共培养可导致SKBR3细胞形态学的显著变化，细胞由圆形变为不规则形，胞体增大，胞质伸出多个突起，呈现细胞运动的形态。细胞迁移实验显示细胞的迁移能力明显增强，提示肿瘤问质细胞对于肿瘤实质细胞的恶性演进具有至关重要作用。共培养实验及用HTl080细胞培养上清处理SKBR3中文摘要细胞可导致SKBR3细胞表达的ErbB2ECD被有效切割，且随处理时间的延长裂解效应更加显著，提示间质细胞及其分泌的蛋白水解酶与乳腺癌细胞释放ErbB2ECD密切相关。这种酶解作用可被EDTA有效地抑制，佐证了ErbB2ECD的切割可能与MMP．

6、2和MMP．9的活化有关．进一步模拟肿瘤组织内部因肿瘤细胞快速增殖而造成的缺氧环境，将SKBR3细胞进行缺氧培养12h，我们观察到大量ErbB2蛋白聚集于SKBR3细胞核一侧，并清楚地观察到ErbB2分子沿核的一侧已。渗透”进入胞核内．丽单纯缺氧或单独HTl080细胞培养上清处理，均未能观察到ErbB2的核转位，提示问质细胞与肿瘤细胞的相互作用及肿瘤组织的缺氧微环境是诱导ErbB2核定位的先决条件．总之。本研究通过构建不同ErbB2突变体表达载体并转染细胞，理论上证实ErbB2有入核潜能，进而在肿瘤细胞和问质细胞共培养及缺氧条件下成功诱导了ErbB2的核转

7、位。但是，目前我们尚不能确定发生核定位的ErbB2分子为何种形式。与HTl080细胞共培养或用HTlO∞细胞培养上清处理及缺氧引起ErbB2入核的内在机制以及ErbB2入核后会引起哪些与肿瘤细胞恶性转化关联的生物学行为亦有待进一步c中j明．彻底揭示ErbB2分予入核机制不仅有助于深入理解ErbB2高表达肿瘤的发生、发展，而且可能为临床对症用药及揭示药物的耐药机制提供新的线索。关键词：ErbB2；核定位；共培养；缺氧2英文摘要ABSTRACTMechanismofEI．bB2NuclearLocalizationErbB2isamemberoftheepid

8、ermalgrowthfactorreceptor(EGFROrE